| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 昆虫抗药性的形成机理 | 第9-13页 |
| 1.1.1 抗性形成学说 | 第9页 |
| 1.1.2 抗性机理概述 | 第9-13页 |
| 1.1.2.1 行为抗性 | 第9页 |
| 1.1.2.2 生理生化抗性 | 第9-13页 |
| 1.2 抗药性的防治策略 | 第13页 |
| 1.2.1 综合治理 | 第13页 |
| 1.2.2 混合用药 | 第13页 |
| 1.2.3 使用增效剂 | 第13页 |
| 1.2.4 镶嵌式防治 | 第13页 |
| 1.3 蛋白酶体 | 第13-15页 |
| 1.3.1 蛋白酶体概述 | 第13-14页 |
| 1.3.2 蛋白酶体结构与功能 | 第14页 |
| 1.3.3 蛋白酶体相关研究进展 | 第14-15页 |
| 1.4 基因芯片技术的发展 | 第15页 |
| 1.5 基因芯片技术在昆虫抗药性研究中的应用 | 第15-17页 |
| 第2章 果蝇细胞培养与溴氰菊酯胁迫下细胞毒性检测 | 第17-21页 |
| 2.1 实验材料 | 第17页 |
| 2.1.1 供试果蝇细胞 | 第17页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 主要仪器与耗材 | 第17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-18页 |
| 2.2.1 细胞传代培养 | 第17-18页 |
| 2.2.2 溴氰菊酯诱导果蝇细胞 | 第18页 |
| 2.2.3 倒置显微镜下细胞形态特征变化 | 第18页 |
| 2.2.4 细胞毒性检测 | 第18页 |
| 2.3 实验结果 | 第18-20页 |
| 2.3.1 溴氰菊酯诱导的细胞形态的变化 | 第18-19页 |
| 2.3.2 溴氰菊酯诱导的细胞毒性的变化 | 第19-20页 |
| 2.4 讨论 | 第20-21页 |
| 第3章 基因芯片检测溴氰菊酯胁迫下基因表达谱的变化 | 第21-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 3.1.1 供试果蝇细胞 | 第21页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第22页 |
| 3.2 实验方法 | 第22-31页 |
| 3.2.1 细胞处理 | 第22页 |
| 3.2.2 总RNA的提取和纯化 | 第22-23页 |
| 3.2.2.1 总RNA的提取 | 第22页 |
| 3.2.2.2 总RNA的纯化 | 第22-23页 |
| 3.2.3 一步法合成cDNA的两条链 | 第23页 |
| 3.2.4 荧光标记cRNA合成与纯化 | 第23-24页 |
| 3.2.4.1 荧光标记cRNA合成 | 第23-24页 |
| 3.2.4.2 cRNA纯化(QIAGEN RNeasy(?)Mini Kit) | 第24页 |
| 3.2.4.3 cRNA浓度测定 | 第24页 |
| 3.2.5 cRNA样品片段化和芯片杂交(4× 44K microarrays) | 第24-25页 |
| 3.2.6 实时荧光定量PCR验证 | 第25-27页 |
| 3.2.6.1 原理 | 第25-26页 |
| 3.2.6.2 PCR反应 | 第26-27页 |
| 3.2.7 免疫印迹分析 | 第27-31页 |
| 3.2.7.1 蛋白样品的提取和定量 | 第27-28页 |
| 3.2.7.2 Western-blotting分析 | 第28-31页 |
| 3.3 实验结果 | 第31-41页 |
| 3.3.1 基因芯片筛选溴氰菊酯诱导的差异表达基因 | 第31-32页 |
| 3.3.2 将筛选得到的差异表达基因进行Gene ontology分类分析 | 第32-39页 |
| 3.3.3 qRT-PCR验证部分筛选到的差异表达基因 | 第39-40页 |
| 3.3.4 WesternBlot检测蛋白水平的表达 | 第40-41页 |
| 3.4 讨论 | 第41-43页 |
| 第4章 蛋白酶体β 2亚基高表达与溴氰菊酯抗性的关系 | 第43-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.1 供试果蝇细胞 | 第43页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第43页 |
| 4.1.3 主要仪器和耗材 | 第43页 |
| 4.2 实验方案 | 第43-50页 |
| 4.2.1 总RNA的提取和反转录 | 第43-44页 |
| 4.2.2 蛋白酶体β2亚基基因克隆 | 第44-47页 |
| 4.2.2.1 引物设计和合成 | 第44页 |
| 4.2.2.2 Prosbeta2基因扩增 | 第44-45页 |
| 4.2.2.3 目的基因的纯化、T/A克隆、序列测序 | 第45-47页 |
| 4.2.3 昆虫表达载体的构建 | 第47-48页 |
| 4.2.4 昆虫表达载体重组质粒转染果蝇细胞 | 第48-49页 |
| 4.2.4.1 昆虫表达载体重组质粒的抽提 | 第48页 |
| 4.2.4.2 重组质粒转染Kc细胞 | 第48-49页 |
| 4.2.5 重组质粒的表达鉴定 | 第49-50页 |
| 4.2.6 细胞毒性检测 | 第50页 |
| 4.3 实验结果 | 第50-52页 |
| 4.3.1 目的基因的克隆 | 第50页 |
| 4.3.2 细胞转染Prosbeta2后Prosbeta2表达量变化 | 第50-52页 |
| 4.3.2.1 半定量RT-PCR检测Prosbeta2的mRNA表达量 | 第50-51页 |
| 4.3.2.2 实时荧光定量PCR检测Prosbeta2的mRNA表达量 | 第51-52页 |
| 4.3.2.3 转染组细胞溴氰菊酯抗性分析 | 第52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 在读学位期间的研究成果 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
