| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-25页 |
| 1.1 冷胁迫 | 第12-18页 |
| 1.1.1 冷胁迫对植物的伤害 | 第12-13页 |
| 1.1.2 冷胁迫信号 | 第13-14页 |
| 1.1.3 冷胁迫的转录调节 | 第14-18页 |
| 1.1.3.1 ICE1-CBF级联转录信号 | 第14-15页 |
| 1.1.3.2 CBF调节子的负调节因子 | 第15-17页 |
| 1.1.3.3 不依赖CBF的调节子 | 第17-18页 |
| 1.1.4 冷胁迫的转录后调节 | 第18页 |
| 1.2 海藻糖 | 第18-21页 |
| 1.2.1 海藻糖在植物中的代谢 | 第19页 |
| 1.2.2 植物中海藻糖相关基因 | 第19-20页 |
| 1.2.3 海藻糖与植物非生物胁迫 | 第20-21页 |
| 1.2.4 海藻糖-6-磷酸 | 第21页 |
| 1.3 LEA蛋白 | 第21-24页 |
| 1.3.1 高等植物中LEA蛋白的分布及分类 | 第22页 |
| 1.3.2 LEA蛋白的结构 | 第22-23页 |
| 1.3.3 LEA蛋白的功能 | 第23页 |
| 1.3.4 高等植物中LEA蛋白的表达与调控 | 第23-24页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 菌种与质粒 | 第25页 |
| 2.1.3 酶与生化试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 引物 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 植物基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.2 载体构建 | 第27-29页 |
| 2.2.2.1 PCR扩增 | 第27页 |
| 2.2.2.2 连接反应 | 第27-28页 |
| 2.2.2.3 酶切 | 第28页 |
| 2.2.2.4 DNA片段的回收(试剂盒法) | 第28页 |
| 2.2.2.5 GhTPS11/DHN/LEA_18/LEA_4基因超表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.2.6 启动子驱动GUS报告基因的表达载体构建 | 第29页 |
| 2.2.3 GhDHN启动子的分离 | 第29-32页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第32页 |
| 2.2.4.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第32页 |
| 2.2.4.2 大肠杆菌细胞的转化 | 第32页 |
| 2.2.5 大肠杆菌中质粒DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.6 农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第33-34页 |
| 2.2.6.1 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.2.6.2 冻融法转化农杆菌细胞 | 第33-34页 |
| 2.2.7 拟南芥的转化及转基因拟南芥的鉴定 | 第34页 |
| 2.2.7.1 拟南芥的转化 | 第34页 |
| 2.2.7.2 转基因拟南芥的鉴定 | 第34页 |
| 2.2.8 RNA的提取纯化与反转录 | 第34-36页 |
| 2.2.8.1 RNA的纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.8.2 RNA的反转录 | 第36页 |
| 2.2.9 实时定量PCR | 第36-37页 |
| 2.2.10 T6P含量的测定 | 第37页 |
| 2.2.11 Trehalose含量的测定 | 第37-38页 |
| 2.2.12 进化树的获得 | 第38页 |
| 2.2.12.1 使用Clustal进行序列比对 | 第38页 |
| 2.2.12.2 Mega5.2构建系统发生树的方法 | 第38页 |
| 2.3 网络资源 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-50页 |
| 3.1 GhTPS11、GhDHN、GhLEA_18及GhLEA_4蛋白分析 | 第39-41页 |
| 3.2 GhTPS11、GhDHN、GhLEA_18及GhLEA_4的表达分析 | 第41-42页 |
| 3.2.1 GhTPS11、GhDHN、GhLEA_18及GhLEA_4的组织表达分析 | 第41页 |
| 3.2.2 GhTPS11、GhDHN、GhLEA_18及GhLEA_4的诱导表达模式分析 | 第41-42页 |
| 3.3 GhTPS11、GhDHN、GhLEA_18及GhLEA_4调节拟南芥非生物胁迫耐性及其机理探究 | 第42-47页 |
| 3.3.1 GhTPS11、GhDHN、GhLEA_18及GhLEA_4超表达植株的获得 | 第42-43页 |
| 3.3.2 GhTPS11超表达植株种子萌发时冷敏感 | 第43-46页 |
| 3.3.2.1 GhTPS11的过表达影响ICE1-CBF途径 | 第45-46页 |
| 3.3.2.2 T6P、Trehalose含量的测定 | 第46页 |
| 3.3.3 GhDHN、GhLEA_18、GhLEA_4超表达株系的表型分析 | 第46-47页 |
| 3.4 GhDHN启动子的分离 | 第47-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
