| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-15页 |
| 1 牛病毒性腹泻(BovineViralDiarrhea) | 第9页 |
| 2 牛病毒性腹泻病毒(BovineViralDiarrheaVirus,BVDV) | 第9-13页 |
| 2.1 BVDV各蛋白的主要功能 | 第10-12页 |
| 2.2 BVDV非编码区的结构与功能 | 第12-13页 |
| 2.3 BVDV反向遗传学 | 第13页 |
| 3 本研究目的和意义 | 第13-15页 |
| 第二部分 牛病毒性腹泻病毒全长cDNA克隆 | 第15-45页 |
| 1 材料 | 第15-18页 |
| 1.1 载体、菌株 | 第15页 |
| 1.2 主要试剂 | 第15页 |
| 1.3 溶液配制 | 第15-18页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第18页 |
| 2 方法 | 第18-34页 |
| 2.1 病毒类型的鉴定 | 第18-25页 |
| 2.2 引物的设计与合成 | 第25-26页 |
| 2.3 重组质粒的构建与提取 | 第26-34页 |
| 3 结果 | 第34-43页 |
| 3.1 牛病毒性腹泻病毒基因型的鉴定 | 第34-36页 |
| 3.2 牛病毒性腹泻病毒全长cDNA克隆及鉴定 | 第36-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 第三部分 牛病毒性腹泻病毒蛋白真核表达载体的构建及其表达检测 | 第45-71页 |
| 1 材料 | 第45-48页 |
| 1.1 菌株、载体与细胞 | 第45页 |
| 1.2 主要试剂 | 第45-46页 |
| 1.3 溶液配制 | 第46-48页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-62页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第48-49页 |
| 2.2 重组质粒的构建与提取 | 第49-57页 |
| 2.3 细胞的复苏与培养 | 第57-58页 |
| 2.4 细胞的转染 | 第58-59页 |
| 2.5 WesternBlot | 第59-62页 |
| 3 结果 | 第62-69页 |
| 3.1 牛病毒性腹泻病毒蛋白真核表达载体的构建与鉴定 | 第62-68页 |
| 3.2 牛病毒性腹泻病毒蛋白的真核表达与检测 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-71页 |
| 第四部分 牛病毒性腹泻病毒蛋白对其非编码区功能发挥的影响 | 第71-82页 |
| 1 材料 | 第71-72页 |
| 1.1 载体、质粒和细胞系 | 第71页 |
| 1.2 主要试剂 | 第71页 |
| 1.3 溶液配制 | 第71-72页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第72页 |
| 2 方法 | 第72-77页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第72-73页 |
| 2.2 重组质粒的构建与提取 | 第73-76页 |
| 2.3 细胞的复苏、培养与冻存 | 第76页 |
| 2.4 细胞的转染 | 第76页 |
| 2.5 双荧光素酶相对活性的检测 | 第76-77页 |
| 3 结果 | 第77-80页 |
| 3.1 牛病毒性腹泻病毒荧光素酶表达载体的构建及鉴定 | 第77-79页 |
| 3.2 牛病毒性腹泻病毒蛋白对其3’UTR功能发挥的影响 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-82页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-88页 |
| 附录 | 第88-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
