| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-49页 |
| 1.1 盾壳霉是重要的生物防治真菌 | 第14-24页 |
| 1.1.1 核盘菌及其所引发的植物病害 | 第14-17页 |
| 1.1.1.1 核盘菌是危害严重的植物病原菌 | 第14-15页 |
| 1.1.1.2 油菜菌核病防治的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.1.2 重寄生菌盾壳霉的研究进展 | 第17-24页 |
| 1.1.2.1 盾壳霉分类及生物学特点 | 第17-18页 |
| 1.1.2.2 盾壳霉的生态学特性 | 第18-19页 |
| 1.1.2.3 盾壳霉对核盘菌的生防机制及互作 | 第19-22页 |
| 1.1.2.4 盾壳霉防病潜能的研究 | 第22-23页 |
| 1.1.2.5 盾壳霉的商品制剂和规模化生产 | 第23-24页 |
| 1.2 真菌分生孢子发育的研究进展 | 第24-31页 |
| 1.2.1 真菌分生孢子的重要意义 | 第24-25页 |
| 1.2.2 构巢曲霉分生孢子发育的调控机制 | 第25-26页 |
| 1.2.3 粗糙脉孢霉分生孢子发育的研究进展 | 第26-28页 |
| 1.2.4 重要植物病原菌分生孢子发育的研究 | 第28-29页 |
| 1.2.5 盾壳霉分生孢子发育的分子调控研究 | 第29-31页 |
| 1.3 信号分子一氧化氮的相关研究 | 第31-39页 |
| 1.3.1 一氧化氮的结构和理化性质 | 第31页 |
| 1.3.2 一氧化氮的体内合成和代谢系统 | 第31-34页 |
| 1.3.3 一氧化氮的生物功能 | 第34-37页 |
| 1.3.3.1 人和动物中一氧化氮的功能 | 第34-35页 |
| 1.3.3.2 植物中一氧化氮的生物功能 | 第35页 |
| 1.3.3.3 黏菌中一氧化氮的生物功能 | 第35-36页 |
| 1.3.3.4 真菌中一氧化氮的生物功能 | 第36页 |
| 1.3.3.5 细菌中一氧化氮的生物功能 | 第36-37页 |
| 1.3.4 一氧化氮在生物体中的信号通路 | 第37-39页 |
| 1.3.4.1 蛋白质的S-巯基亚硝基化 | 第37-38页 |
| 1.3.4.2 过渡态金属的亚硝基化修饰 | 第38-39页 |
| 1.3.4.3 酪氨酸残基的硝基化修饰 | 第39页 |
| 1.4 鉴定差异表达基因的研究进展 | 第39-43页 |
| 1.4.1 mRNA差异显示技术 | 第40-41页 |
| 1.4.2 抑制差减杂交技术 | 第41-42页 |
| 1.4.3 基因芯片技术 | 第42-43页 |
| 1.4.4 新型高通量测序技术 | 第43页 |
| 1.5 真菌基因功能研究的技术 | 第43-48页 |
| 1.5.1 候选研究基因的确定 | 第44-45页 |
| 1.5.2 基因敲除技术 | 第45-46页 |
| 1.5.3 RNA干涉—基因沉默技术 | 第46-47页 |
| 1.5.4 基因超量表达技术 | 第47-48页 |
| 1.6 本研究的立题依据和目的与意义 | 第48-49页 |
| 第二章 环鸟苷酸(cGMP)参与一氧化氮调控盾壳霉分生孢子形成的信号途径 | 第49-61页 |
| 2.1 材料和方法 | 第49-52页 |
| 2.1.1 菌株、培养和产孢条件 | 第49页 |
| 2.1.2 盾壳霉分生孢子发育过程和ODQ的影响 | 第49-50页 |
| 2.1.3 盾壳霉中NOS-like活性和cGMP含量的检测 | 第50-51页 |
| 2.1.4 ODQ对盾壳霉分生孢子产量的抑制作用 | 第51页 |
| 2.1.5 内源和外源NO对盾壳霉体内cGMP水平的调节 | 第51-52页 |
| 2.1.6 外源cGMP对ZS-1T2029的影响 | 第52页 |
| 2.2 结果与分析 | 第52-58页 |
| 2.2.1 盾壳霉分生孢子器发育阶段及NOS-like活性 | 第52-53页 |
| 2.2.2 体内cGMP含量和可溶性鸟苷酸环化酶的活性 | 第53-54页 |
| 2.2.3 ODQ抑制盾壳霉分生孢子的发育 | 第54-55页 |
| 2.2.4 盾壳霉cGMP的含量受一氧化氮水平调控 | 第55-57页 |
| 2.2.5 外源一氧化氮可以刺激真菌体内cGMP的含量积累 | 第57-58页 |
| 2.2.6 外源cGMP不能互补突变体ZS-1T2029产孢 | 第58页 |
| 2.3 讨论 | 第58-61页 |
| 2.3.1 真菌体内一氧化氮的来源 | 第59页 |
| 2.3.2 第二信使cGMP在真菌中的作用 | 第59-60页 |
| 2.3.3 第二信使cGMP和一氧化氮信号系统 | 第60-61页 |
| 第三章 盾壳霉S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(CmGSNOR)功能研究 | 第61-86页 |
| 3.1 材料和方法 | 第61-66页 |
| 3.1.1 菌株、培养和保存条件 | 第61页 |
| 3.1.2 CmGSNOR序列的获得和分析 | 第61-62页 |
| 3.1.3 目的基因敲除和互补转化子的获得 | 第62-63页 |
| 3.1.4 GSNOR酶学催化活性测定 | 第63-64页 |
| 3.1.5 盾壳霉体内SNO和NO水平的检测 | 第64-65页 |
| 3.1.6 敲除转化子生物学特性的分析 | 第65页 |
| 3.1.7 敲除转化子分生孢子萌发特性分析 | 第65页 |
| 3.1.8 敲除转化子抗逆性的研究 | 第65-66页 |
| 3.2 结果和分析 | 第66-82页 |
| 3.2.1 盾壳霉S-亚硝基谷胱甘肽还原酶CmGSNOR | 第66-68页 |
| 3.2.2 同源重组敲除盾壳霉中的CmGSNOR基因 | 第68-70页 |
| 3.2.3 CmGSNOR的缺失引起体内SNO和NO水平上升 | 第70-72页 |
| 3.2.4 △Cmgsnor菌株菌丝生长、分生孢子器发育异常 | 第72-75页 |
| 3.2.5 CmGSNOR的缺失改变分生孢子的形状并促进萌发 | 第75-77页 |
| 3.2.6 基因敲除突变体对GSNO敏感但对H_2O_2的抗性增强 | 第77-80页 |
| 3.2.7 △Cmgsnor对高盐、高渗环境的抗性变化 | 第80-82页 |
| 3.3 讨论 | 第82-86页 |
| 3.3.1 GSNO在盾壳霉体内的代谢 | 第82-83页 |
| 3.3.2 SNO和蛋白质亚硝基化修饰的生物功能 | 第83-84页 |
| 3.3.3 GSNOR在不同系统中生物功能的比较 | 第84-86页 |
| 第四章 盾壳霉分生孢子形成阶段受内源一氧化氮诱导上调表达的基因文库 | 第86-117页 |
| 4.1 材料和方法 | 第86-95页 |
| 4.1.1 菌株和培养条件 | 第86页 |
| 4.1.2 检测依赖L-精氨酸的内源一氧化氮合成 | 第86页 |
| 4.1.3 菌丝材料的收集 | 第86-87页 |
| 4.1.4 总RNA的提取及mRNA的分离 | 第87-88页 |
| 4.1.5 抑制性差减杂交流程 | 第88-92页 |
| 4.1.5.1 cDNA第一链的合成 | 第88页 |
| 4.1.5.2 合成cDNA第二链 | 第88-89页 |
| 4.1.5.3 RsaⅠ酶切 | 第89-90页 |
| 4.1.5.4 接头连接 | 第90页 |
| 4.1.5.5 差减杂交 | 第90-91页 |
| 4.1.5.6 两轮选择性PCR扩增 | 第91-92页 |
| 4.1.6 差减文库的生成及筛选 | 第92-93页 |
| 4.1.6.1 差减cDNA文库的生成 | 第92页 |
| 4.1.6.2 反向Northern斑点杂交膜的制备 | 第92-93页 |
| 4.1.6.3 反向Northern斑点杂交 | 第93页 |
| 4.1.7 差异表达基因的测序分析 | 第93页 |
| 4.1.8 差异表达基因的表达模式分析 | 第93-94页 |
| 4.1.9 RNAi验证候选基因的生物功能 | 第94-95页 |
| 4.2 结果与分析 | 第95-103页 |
| 4.2.1 一氧化氮诱导盾壳霉分生孢子的发育 | 第95页 |
| 4.2.2 一氧化氮上调表达基因cDNA差减文库的构建 | 第95-97页 |
| 4.2.3 文库中EST的测序,数据分析和功能分类 | 第97-100页 |
| 4.2.4 文库中部分EST的表达模式分析 | 第100-101页 |
| 4.2.5 RNAi验证CmFDS1和CmCAP1的基因功能 | 第101页 |
| 4.2.6 三个假定转录因子的表达分析 | 第101-103页 |
| 4.3 讨论 | 第103-117页 |
| 4.3.1 内源和外源NO调控真菌基因表达的差异 | 第104-105页 |
| 4.3.2 甾醇类物质在分生孢子发育中的作用 | 第105页 |
| 4.3.3 差减文库中可能与盾壳霉产孢相关的基因 | 第105-106页 |
| 4.3.4 可能与盾壳霉产孢相关的代谢途径 | 第106-107页 |
| 4.3.5 一氧化氮调节基因表达的机理 | 第107-117页 |
| 第五章 结论和展望 | 第117-120页 |
| 5.1 论文的主要结论 | 第117-118页 |
| 5.2 展望 | 第118-119页 |
| 5.3 论文主要创新点 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-144页 |
| 附录1: 论文中主要实验方法详细步骤 | 第144-149页 |
| 附录2: 培养基和试剂的配方 | 第149-152页 |
| 附录3: SSH技术流程示意图 | 第152-153页 |
| 附录4: 发表论文情况 | 第153-154页 |
| 致谢 | 第154-155页 |
