| 中文摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩略语 | 第13-16页 |
| 前言 | 第16-19页 |
| 研究现状、成果 | 第16页 |
| 研究目的、方法 | 第16-19页 |
| 一、TSHβ剪接变体在正常人外周血中的研究 | 第19-39页 |
| 1.1 对象与方法 | 第20-28页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第20页 |
| 1.1.2 TSHβ剪接变体蛋白在血清中的检测 | 第20-24页 |
| 1.1.3 RT-PCR方法鉴定人PBL中TSHβ剪接变体mRNA表达 | 第24-26页 |
| 1.1.4 Western Blot方法鉴定人PBL中TSH剪接变体蛋白表达 | 第26-27页 |
| 1.1.5 免疫荧光标记人PBL中TSHβ剪接变体表达 | 第27-28页 |
| 1.2 结果 | 第28-33页 |
| 1.2.1 在正常人血清中存在TSH剪接变体 | 第28页 |
| 1.2.2 正常人PBL中TSHβ剪接变体mRNA表达 | 第28-29页 |
| 1.2.3 正常人胎盘中TSH剪接变体mRNA表达 | 第29-30页 |
| 1.2.4 正常人PBL中TSHβ剪接变体蛋白表达 | 第30页 |
| 1.2.5 免疫荧光标记人PBL中TSHβ剪接变体表达 | 第30-33页 |
| 1.3 讨论 | 第33-37页 |
| 1.3.1 血浆蛋白质组成及特性 | 第33页 |
| 1.3.2 血清样品前处理 | 第33-35页 |
| 1.3.3 血清中存在TSHβ剪接变体蛋白 | 第35-36页 |
| 1.3.4 人PBL表达TSHβ剪接变体蛋白 | 第36-37页 |
| 1.4 小结 | 第37-39页 |
| 二、人TSHα与TSHβ剪接变体体外结合验证实验 | 第39-73页 |
| 2.1 对象与方法 | 第39-57页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 2.1.2 人TSHα基因的克隆与表达 | 第41-49页 |
| 2.1.3 人TSHβ剪接变体的克隆与表达 | 第49-56页 |
| 2.1.4 Co-IP鉴定TSHα是否和TSHβ剪接变体形成二聚体 | 第56-57页 |
| 2.2 结果 | 第57-66页 |
| 2.2.1 人TSHα基因的成功克隆与表达 | 第57-61页 |
| 2.2.2 人TSHβ剪接变体的成功克隆与表达 | 第61-65页 |
| 2.2.3 TSHα能与TSHβ剪接变体形成二聚体 | 第65-66页 |
| 2.3 讨论 | 第66-71页 |
| 2.3.1 建立稳定表达TSHα的CHO细胞系 | 第66-69页 |
| 2.3.2 建立稳定表达TSHβ剪接变体的CHO细胞系 | 第69-70页 |
| 2.3.3 TSHβ剪接变体能与TSHα形成二聚体 | 第70-71页 |
| 2.3.4 TSHβ剪接变体能与TSHα形成二聚体的生物学意义 | 第71页 |
| 2.4 小结 | 第71-73页 |
| 三、不同病理生理条件对TSHβ剪接变体表达影响 | 第73-101页 |
| 3.1 对象与方法 | 第73-81页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第74页 |
| 3.1.2 GD和HT患者PBL中TSHβ剪接变体mRNA表达差异 | 第74-78页 |
| 3.1.3 LPS影响人PBL中TSHβ剪接变体mRNA表达 | 第78-80页 |
| 3.1.4 地塞米松影响人PBL中TSHβ剪接变体mRNA表达 | 第80页 |
| 3.1.5 TRH和T_3影响人PBL中TSHβ剪接变体mRNA表达 | 第80-81页 |
| 3.1.6 统计学分析 | 第81页 |
| 3.2 结果 | 第81-90页 |
| 3.2.1 HT患者PBL中TSHβ剪接变体mRNA表达差异 | 第81-82页 |
| 3.2.2 GD患者PBL中TSHβ剪接变体mRNA表达差异 | 第82-83页 |
| 3.2.3 PBL中TSHβ剪接变体mRNA表达与血FT_3、FT_4、TSH及BMI相关性 | 第83-85页 |
| 3.2.4 LPS刺激人PBL后TSHβ剪接变体mRNA表达变化 | 第85页 |
| 3.2.5 地塞米松刺激人PBL后TSHβ剪接变体mRNA表达变化 | 第85-88页 |
| 3.2.6 TRH刺激人PBL后TSHβ剪接变体mRNA表达变化 | 第88-89页 |
| 3.2.7 T_3刺激人PBL后TSHp剪接变体mRNA表达变化 | 第89-90页 |
| 3.3 讨论 | 第90-99页 |
| 3.3.1 定量PCR数据处理方法的选择 | 第90-92页 |
| 3.3.2 TSHβ剪接变体在HT和GD患者PBL中的差异表达 | 第92-93页 |
| 3.3.3 TSHβ剪接变体在LPS致炎过程中的表达变化 | 第93-98页 |
| 3.3.4 地塞米松抑制人PBL中TSHβ剪接变体mRNA表达 | 第98页 |
| 3.3.5 TRH和T_3影响人PBL中TSHβ剪接变体表达 | 第98页 |
| 3.3.6 TSHβ剪接变体可能的免疫调控作用 | 第98-99页 |
| 3.4 小结 | 第99-101页 |
| 四、人TSH剪接变体蛋白的原核表达与纯化 | 第101-116页 |
| 4.1 对象与方法 | 第101-108页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第101-102页 |
| 4.1.2 人TSHβ剪接变体全编码区序列的获取 | 第102-104页 |
| 4.1.3 构建PET-28a-TSHβ剪接变体原核表达载体 | 第104-107页 |
| 4.1.4 IPTG诱导表达 | 第107页 |
| 4.1.5 免疫亲合层析纯化目的蛋白 | 第107页 |
| 4.1.6 诱导表达产物的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第107-108页 |
| 4.1.7 BCA法蛋白定量 | 第108页 |
| 4.1.8 Western Blot鉴定融合蛋白的抗原性 | 第108页 |
| 4.2 结果 | 第108-112页 |
| 4.2.1 获取人TSHβ剪接变体全编码区序列 | 第108-109页 |
| 4.2.2 鉴定PET-28a-TSHβ剪接变体重组表达质粒 | 第109-110页 |
| 4.2.3 免疫亲和层析纯化TSH剪接变体重组蛋白 | 第110-111页 |
| 4.2.4 蛋白定量 | 第111页 |
| 4.2.5 Western Blot鉴定TSHβ剪接变体融合蛋白的抗原性 | 第111-112页 |
| 4.3 讨论 | 第112-114页 |
| 4.4 小结 | 第114-116页 |
| 全文结论 | 第116-119页 |
| 论文创新点 | 第119-120页 |
| 参考文献 | 第120-129页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第129-130页 |
| 附录 | 第130-144页 |
| 综述 | 第144-197页 |
| 促甲状腺激素与自身免疫性甲状腺疾病的研究进展 | 第144-197页 |
| 综述参考文献 | 第187-197页 |
| 致谢 | 第197页 |
