| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第10-20页 |
| 1.1 灰绿曲霉及灰绿霉素A简介 | 第10页 |
| 1.2 常见反应器类型 | 第10-12页 |
| 1.3 简并PCR技术 | 第12-13页 |
| 1.3.1 概述 | 第12页 |
| 1.3.2 简并引物的设计 | 第12页 |
| 1.3.3 简并PCR的反应条件 | 第12-13页 |
| 1.4 染色体步移方法简介 | 第13页 |
| 1.5 霉菌菌丝极化生长 | 第13-18页 |
| 1.5.1 概述 | 第13页 |
| 1.5.2 微管 | 第13-16页 |
| 1.5.3 马达蛋白 | 第16-17页 |
| 1.5.4 细胞末端标记蛋白或地标蛋白 | 第17-18页 |
| 1.6 本课题的研究背景及意义 | 第18-20页 |
| 第2章 极化生长基因AgKipA,AgTeaA和AgTeaR的克隆与序列分析 | 第20-39页 |
| 2.1 前言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第20页 |
| 2.2.2 主要分子生物学试剂及试剂盒 | 第20页 |
| 2.2.3 培养基及培养条件 | 第20-21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-25页 |
| 2.3.1 灰绿曲霉基因组提取 | 第21页 |
| 2.3.2 大肠杆菌Top10感受态细胞的制备及转化 | 第21页 |
| 2.3.3 简并引物设计及简并PCR | 第21-22页 |
| 2.3.4 染色体步移 | 第22页 |
| 2.3.5 序列分析 | 第22-23页 |
| 2.3.6 灰绿曲霉RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.3.7 除去RNA中的残留DNA | 第24-25页 |
| 2.3.8 逆转录PCR | 第25页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第25-38页 |
| 2.4.1 AgKipA,AgTeaA和AgTeaR基因的简并引物设计 | 第25页 |
| 2.4.2 简并PCR | 第25-32页 |
| 2.4.3 AgKipA,AgTeaA和AgTeaR基因全长以及两端侧翼序列的获得 | 第32-33页 |
| 2.4.4 逆转录PCR鉴定AgKipA,AgTeaA和AgTeaR基因中内含子的位置 | 第33页 |
| 2.4.5 AgKipA,AgTeaA和AgTeaR序列分析 | 第33-36页 |
| 2.4.6 KipA,TeaA和TeaR系统进化树构建 | 第36-38页 |
| 2.5 小结 | 第38-39页 |
| 第3章 △AgKipA和△AgTeaR菌株的构建 | 第39-49页 |
| 3.1 前言 | 第39页 |
| 3.2 实验材料 | 第39-40页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第39页 |
| 3.2.2 主要分子生物学试剂及试剂盒 | 第39页 |
| 3.2.3 培养基及培养条件 | 第39-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-43页 |
| 3.3.3 敲除质粒构建策略 | 第40页 |
| 3.3.4 引物设计及PCR反应 | 第40-41页 |
| 3.3.5 灰绿曲霉原生质体制备与转化 | 第41-43页 |
| 3.3.6 灰绿曲霉转化子筛选 | 第43页 |
| 3.3.7 孢子PCR | 第43页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第43-48页 |
| 3.4.1 AgKipA和AgTeaR敲除质粒构建 | 第43-47页 |
| 3.4.2 AAgKipA和△AgTeaR菌株构建 | 第47-48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 第4章 △AgKipA和△AgTeaR菌株表型分析及抗剪切效果鉴定 | 第49-57页 |
| 4.1 前言 | 第49页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第49-51页 |
| 4.2.1 培养基及培养条件 | 第49页 |
| 4.2.2 菌丝生长速度考察 | 第49-50页 |
| 4.2.3 显微镜下的菌丝形态观察 | 第50页 |
| 4.2.4 分生孢子萌发方式考察 | 第50页 |
| 4.2.5 分生孢子及子囊果计数方法 | 第50页 |
| 4.2.6 抗剪切效果鉴定 | 第50-51页 |
| 4.2.7 灰绿霉素A测定 | 第51页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第51-56页 |
| 4.3.1 缺失株与野生株生长速度比较 | 第51页 |
| 4.3.2 显微镜下的菌丝形态 | 第51-52页 |
| 4.3.3 分生孢子萌发 | 第52-53页 |
| 4.3.4 AgKipA和AgTeaR基因的缺失对灰绿曲霉发育的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.5 △AgKipA,△AgTeaR和灰绿曲霉野生株发酵液颜色比较 | 第54页 |
| 4.3.6 △AgKipA,△AgTeaR和灰绿曲霉野生株灰绿霉素A产量过程曲线 | 第54-55页 |
| 4.3.7 △AgKipA和△AgTeaR的抗剪切效果鉴定 | 第55-56页 |
| 4.4 小结 | 第56-57页 |
| 第5章 结论与展望 | 第57-58页 |
| 5.1 结论 | 第57页 |
| 5.2 展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
