| 英文缩写符号及其中英文对照表 | 第1-12页 |
| 中文摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 1 前言 | 第17-35页 |
| ·低温胁迫调控生理生化反应 | 第17-21页 |
| ·膜系统变化 | 第17-18页 |
| ·代谢调节物质的改变 | 第18-20页 |
| ·抗氧化系统 | 第20-21页 |
| ·低温胁迫调控分子水平的改变 | 第21-29页 |
| ·植物对低温胁迫信号的感知和传导 | 第21-23页 |
| ·转录调控 | 第23-26页 |
| ·转录后调控 | 第26-29页 |
| ·低温在果树学上的研究进展 | 第29-32页 |
| ·低温对果树的伤害 | 第30页 |
| ·果树抗寒生理研究 | 第30-32页 |
| ·果树基因工程 | 第32页 |
| ·bHLH 转录因子研究 | 第32-34页 |
| ·bHLH 转录因子结构 | 第32-33页 |
| ·bHLH 转录因子与抗逆研究 | 第33-34页 |
| ·课题的提出和意义 | 第34-35页 |
| 2 实验材料和方法 | 第35-69页 |
| ·实验材料 | 第35-37页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·菌株及质粒 | 第35页 |
| ·酶及生化试剂 | 第35-36页 |
| ·引物 | 第36-37页 |
| ·实验方法 | 第37-69页 |
| ·RNA 提取以及cDNA 链的合成 | 第37-40页 |
| ·MdCIbHLH1 基因筛选 | 第40-41页 |
| ·模板标定 | 第40页 |
| ·MdCIbHLH1 筛选及全长扩增 | 第40-41页 |
| ·序列测定 | 第41页 |
| ·基因组DNA 提取 | 第41-42页 |
| ·MdCIbHLH1 基因的内含子和外显子分析 | 第42页 |
| ·MdCIbHLH1 基因的功能域及同源性分析 | 第42-43页 |
| ·MdCIbHLH1 基因的表达分析及逆境响应 | 第43-45页 |
| ·逆境处理 | 第43页 |
| ·半定量表达分析 | 第43-44页 |
| ·实时定量PCR 分析 | 第44-45页 |
| ·MdCIbHLH1 基因真核表达 | 第45-53页 |
| ·PCR 扩增真核表达用的目的基因 | 第45页 |
| ·PCR 扩增产物的回收 | 第45-46页 |
| ·PCR 回收产物转化克隆载体 | 第46-47页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第47-49页 |
| ·克隆载体的酶切鉴定 | 第49页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·真核表达载体线性化 | 第50-51页 |
| ·pPICZαA-MdCIbHLH1 电击转化毕赤酵母 | 第51-52页 |
| ·酵母转化子的筛选与鉴定 | 第52-53页 |
| ·毕赤酵母中的诱导表达 | 第53页 |
| ·EMSA | 第53-58页 |
| ·探针合成 | 第53-56页 |
| ·EMSA 胶的配制 | 第56页 |
| ·EMSA 结合反应 | 第56-57页 |
| ·电泳分析、转膜及显影 | 第57-58页 |
| ·苹果愈伤、烟草、拟南芥、苹果组培苗转基因 | 第58-62页 |
| ·转基因表达载体的构建 | 第58页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404 感受态细胞的制备与转化 | 第58-59页 |
| ·根癌农杆菌GV3101 感受态细胞的制备与转化 | 第59-60页 |
| ·农杆菌介导的苹果愈伤组织的转化 | 第60页 |
| ·农杆菌介导的烟草的转化 | 第60-61页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥的转化 | 第61-62页 |
| ·农杆菌介导的苹果的转化 | 第62页 |
| ·转基因鉴定 | 第62-63页 |
| ·转基因植株的基因组DNA 鉴定 | 第62-63页 |
| ·转基因植株的RT-PCR 鉴定 | 第63页 |
| ·MdCIbHLH1-GFP 蛋白Western 杂交 | 第63-66页 |
| ·在活体条件下鉴定MdCIbHLH1 泛素化、SUMO 化 | 第66-67页 |
| ·转基因植株抗性鉴定 | 第67-69页 |
| ·转基因苹果愈伤逆境条件下生长量的测定 | 第67页 |
| ·转基因烟草抗性分析 | 第67-68页 |
| ·转基因拟南芥抗性分析 | 第68页 |
| ·转基因苹果组培苗抗性分析 | 第68页 |
| ·统计分析 | 第68-69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-91页 |
| ·MdCIbHLH1 基因的筛选及基因组序列分析 | 第69-70页 |
| ·MdCIbHLH1 基因的筛选以及全长扩增 | 第69页 |
| ·MdCIbHLH1 基因的内含子和外显子分析 | 第69-70页 |
| ·MdCIbHLH1 进化树及保守功能域分析 | 第70-73页 |
| ·MdCIbHLH1 基因的表达分析 | 第73页 |
| ·MdCIbHLH1 基因的逆境响应 | 第73-77页 |
| ·MdCIbHLH1 基因在苹果幼嫩器官中的逆境响应情况 | 第73-74页 |
| ·MdCIbHLH1 基因在苹果实生苗中的逆境响应情况 | 第74-77页 |
| ·pPICZαA-MdCIbHLH1 真核表达载体构建 | 第77-78页 |
| ·MdCIbHLH1 真核表达 | 第78-79页 |
| ·EMSA 分析 | 第79-80页 |
| ·MdCIbHLH1 转基因表达载体构建 | 第80-81页 |
| ·苹果愈伤组织转基因植株的获得及抗性鉴定 | 第81-83页 |
| ·苹果愈伤组织转基因植株的获得 | 第81页 |
| ·苹果愈伤组织转基因植株的表达分析及抗性鉴定 | 第81-83页 |
| ·MdCIbHLH1 蛋白的降解、修饰 | 第83-85页 |
| ·MdCIbHLH1 蛋白的降解 | 第83-84页 |
| ·MdCIbHLH1 蛋白的蛋白质修饰 | 第84-85页 |
| ·烟草转基因植株的鉴定及抗性分析 | 第85-87页 |
| ·烟草转基因植株的获得 | 第85页 |
| ·烟草转基因植株幼苗的抗性鉴定 | 第85页 |
| ·烟草转基因植株成苗的抗性鉴定 | 第85-87页 |
| ·拟南芥转基因植株的鉴定及抗性分析 | 第87-89页 |
| ·苹果转基因组培苗的鉴定及抗性分析 | 第89-91页 |
| ·苹果转基因组培苗的获得 | 第89页 |
| ·苹果转基因组培苗的抗性鉴定 | 第89-91页 |
| 4 讨论 | 第91-95页 |
| ·MdCIbHLH1 基因是苹果中的ICEs 类基因 | 第91-92页 |
| ·MdCIbHLH1 基因是通过CBF 途径起作用的 | 第92-93页 |
| ·MdCIbHLH1 基因与其它ICEs 基因的差异 | 第93-94页 |
| ·MdCIbHLH1 基因在苹果研究中的意义 | 第94-95页 |
| 5 结论与创新点 | 第95-96页 |
| ·结论 | 第95页 |
| ·创新点 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-107页 |
| 附录 | 第107-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 附件 | 第119页 |
