| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| 1 瘦素的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.1 瘦素的发现 | 第14-15页 |
| 1.2 Leptin的结构 | 第15-16页 |
| 1.3 Leptin的功能 | 第16-17页 |
| 1.4 Leptin的组织分布 | 第17-18页 |
| 2 瘦素受体 | 第18-21页 |
| 2.1 瘦素受体基因的克隆 | 第18页 |
| 2.2 瘦素受体的结构 | 第18-19页 |
| 2.3 瘦素短型受体的功能 | 第19-20页 |
| 2.4 瘦素受体的分布 | 第20-21页 |
| 3 瘦素信号传导通路 | 第21-22页 |
| 3.1 JAK-STAT代谢通路 | 第21-22页 |
| 3.2 IRS-PI3K信号通路 | 第22页 |
| 4 本研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 鲫鱼LEPTIN的原核表达 | 第24-50页 |
| 1 引言 | 第24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 主要试剂及相关溶液的配制 | 第24-26页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.3 构建pGEX-4T-2-Leptin原核表达载体 | 第27-34页 |
| 2.4 融合蛋白GST-Leptin的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.5 融合蛋白GST-Leptin的可溶性检测 | 第35-36页 |
| 2.6 包涵体的处理 | 第36-37页 |
| 2.7 构建pET32a(+)-Leptin载体并表达 | 第37页 |
| 2.8 融合蛋白Trx-Leptin的纯化 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-48页 |
| 3.1 鲫鱼肝脏总RNA的提取 | 第38页 |
| 3.2 鲫鱼肝脏Leptin目的基因的扩增 | 第38-39页 |
| 3.3 重组表达载体pGEX-4T-2-Leptin的构建及鉴定 | 第39页 |
| 3.4 融合蛋白GST-Leptin的诱导表达 | 第39-42页 |
| 3.5 融合蛋白GST-Leptin的可溶性检测 | 第42-44页 |
| 3.6 包涵体的提取及洗涤 | 第44页 |
| 3.7 包涵体的变性、复性及目的蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| 3.8 重组表达载体pET32a(+)-Leptin的构建 | 第45-46页 |
| 3.9 融合蛋白Trx-Leptin的诱导表达 | 第46页 |
| 3.10 融合蛋白Trx-Leptin的可溶性检测及纯化 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 第三章 鲫鱼瘦素受体多克隆抗体的制备 | 第50-60页 |
| 1 引言 | 第50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-55页 |
| 2.1 主要试剂及溶液的配制 | 第50-51页 |
| 2.2 主要仪器 | 第51-52页 |
| 2.3 实验材料 | 第52页 |
| 2.4 瘦素受体多克隆抗体的制备 | 第52-53页 |
| 2.5 竞争性抑制法检测鲫鱼组织中瘦素受体 | 第53-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-57页 |
| 3.1 ELISA检测血清抗体滴度 | 第55页 |
| 3.2 ELISA检测纯化抗体效价 | 第55-56页 |
| 3.3 竞争性抑制法检测鲫鱼组织中瘦素受体 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| 第四章 鲫鱼可溶性瘦素受体基因的克隆及其在血清中的鉴定 | 第60-68页 |
| 1 引言 | 第60-61页 |
| 2 材料与方法 | 第61-64页 |
| 2.1 主要试剂及溶液 | 第61页 |
| 2.2 主要仪器 | 第61-62页 |
| 2.3 扩增鲫鱼Leptin短型受体cclpr-s2 cDNA序列并测序 | 第62页 |
| 2.4 鲫鱼血清的获取 | 第62页 |
| 2.5 Pull-down检测鲫鱼sLR | 第62-64页 |
| 3 结果与分析 | 第64-66页 |
| 3.1 鲫鱼Leptin短型受体cclpr-s2的扩增 | 第64-65页 |
| 3.2 鲫鱼血清sLR的检测 | 第65页 |
| 3.3 多肽竞争性抑制法分析特异性 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 结论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第86-88页 |
