| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第14-22页 |
| 1. 几丁质、壳聚糖和壳寡糖 | 第14-16页 |
| 1.1 几丁质 | 第14页 |
| 1.2 壳聚糖 | 第14-15页 |
| 1.3 壳寡糖 | 第15-16页 |
| 1.3.1 壳寡糖的应用 | 第15页 |
| 1.3.2 壳寡糖的制备 | 第15-16页 |
| 2. 壳聚糖酶(chitosanase) | 第16-22页 |
| 2.1 壳聚糖酶的来源 | 第17页 |
| 2.2 壳聚糖酶的分类与结构特点 | 第17-19页 |
| 2.3 壳聚糖酶的性质特点 | 第19-20页 |
| 2.3.1 分子质量 | 第19页 |
| 2.3.2 最适反应温度与热稳定性 | 第19页 |
| 2.3.3 最适 pH 值与 pH 值稳定性 | 第19页 |
| 2.3.4 金属离子的影响 | 第19-20页 |
| 2.3.5 底物特异性 | 第20页 |
| 2.4 壳聚糖酶的研究进展 | 第20-21页 |
| 2.5 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 第一章 产壳聚糖酶菌株 Renibacterium sp. QD1 的筛选及鉴定 | 第22-34页 |
| 1. 实验材料 | 第22-23页 |
| 1.1 试剂 | 第22页 |
| 1.2 仪器 | 第22-23页 |
| 1.3 菌种、质粒 | 第23页 |
| 1.4 培养基 | 第23页 |
| 2. 实验方法与步骤 | 第23-26页 |
| 2.1 胶体壳聚糖配制方法 | 第23-24页 |
| 2.2 菌种的初筛 | 第24页 |
| 2.3 菌种的复筛 | 第24页 |
| 2.4 降解产物分析 | 第24页 |
| 2.5 菌种鉴定 | 第24-26页 |
| 2.5.1 菌的形态观察 | 第24页 |
| 2.5.2 提取细菌基因组 DNA | 第24页 |
| 2.5.3 制备感受态细胞 E.coli DH5α | 第24页 |
| 2.5.4 细菌 16S rDNA 序列的克隆与测定 | 第24-25页 |
| 2.5.5 序列分析 | 第25-26页 |
| 3. 结果与分析 | 第26-33页 |
| 3.1 菌株筛选结果 | 第26页 |
| 3.2 降解产物分析 | 第26-29页 |
| 3.3 QD1 形态观察 | 第29页 |
| 3.4 QD116SrDNA 基因的克隆与序列分析 | 第29-31页 |
| 3.5 16SrDNA 基因序列测序结果 | 第31-32页 |
| 3.6 16SrDNA 基因序列分析和系统发育树的构建 | 第32-33页 |
| 4. 小结与讨论 | 第33-34页 |
| 第二章 Renibacterium sp. QD1 所产壳聚糖酶的分离纯化及鉴定 | 第34-43页 |
| 1 实验材料 | 第34-35页 |
| 1.1 试剂材料 | 第34页 |
| 1.2 实验仪器 | 第34页 |
| 1.3 缓冲液 | 第34-35页 |
| 1.4 培养基 | 第35页 |
| 1.5 菌株 | 第35页 |
| 2 实验方法 | 第35-38页 |
| 2.1 酶活力测定方法-DNS 法 | 第35页 |
| 2.2 酶蛋白浓度测定的方法 | 第35-36页 |
| 2.3 粗酶液的制备 | 第36页 |
| 2.4 SDS-PAGE 后蛋白质复性 | 第36页 |
| 2.5 硫酸铵盐析 | 第36-37页 |
| 2.6 疏水层析（HIC） | 第37页 |
| 2.7 SDS-PAGE 蛋白电泳 | 第37页 |
| 2.8 酶活测定标准曲线制作方法 | 第37-38页 |
| 3 实验结果 | 第38-42页 |
| 3.1 DNS 法测定氨基葡萄糖盐酸盐标准曲线 | 第38-39页 |
| 3.2 BCA 法测定蛋白含量 | 第39-40页 |
| 3.3 SDS-PAGE 凝胶原位复性 | 第40页 |
| 3.4 硫酸铵沉淀 | 第40页 |
| 3.5 疏水层析 | 第40-41页 |
| 3.6 SDS-PAGE 电泳 | 第41页 |
| 3.7 分离纯化结果 | 第41-42页 |
| 4 小结与讨论 | 第42-43页 |
| 第三章 壳聚糖酶 Csn-A 的酶学性质研究 | 第43-52页 |
| 1 材料与方法 | 第43-45页 |
| 1.1 实验材料 | 第43页 |
| 1.1.1 仪器 | 第43页 |
| 1.1.2 试剂 | 第43页 |
| 1.1.3 材料 | 第43页 |
| 1.2 实验方法 | 第43-45页 |
| 1.2.1 底物特异性实验 | 第43页 |
| 1.2.2 酶的最适温度 | 第43-44页 |
| 1.2.3 酶的热稳定性研究 | 第44页 |
| 1.2.4 酶的最适反应 pH | 第44页 |
| 1.2.5 酶的 pH 稳定性 | 第44页 |
| 1.2.6 EDTA、SDS 以及金属离子对酶活性的影响 | 第44-45页 |
| 1.2.7 酶降解产物分析与降解方式研究 | 第45页 |
| 2 实验结果 | 第45-50页 |
| 2.1 酶的底物特异性 | 第45-46页 |
| 2.2 酶的最适反应温度 | 第46页 |
| 2.3 酶的温度稳定性 | 第46-47页 |
| 2.4 酶的最适反应 pH | 第47页 |
| 2.5 酶的 pH 稳定性 | 第47-48页 |
| 2.6 EDTA、SDS 以及金属离子对酶活性的影响 | 第48-49页 |
| 2.7 不同浓度 Mn~(2+)对酶活性的影响 | 第49页 |
| 2.8 酶降解产物分析与降解方式 | 第49-50页 |
| 3 小结与讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 Renibacterium sp. QD1 产壳聚糖酶菌株发酵条件的优化 | 第52-63页 |
| 1. 材料与方法 | 第52-55页 |
| 1.1 材料与仪器 | 第52-53页 |
| 1.1.1 试剂与原料 | 第52页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第52页 |
| 1.1.3 菌株 | 第52页 |
| 1.1.4 缓冲液 | 第52-53页 |
| 1.2 实验方法 | 第53-55页 |
| 1.2.1 酶活的测定方法 | 第53页 |
| 1.2.2 菌株最适培养温度研究 | 第53页 |
| 1.2.3 QD1 菌株生长曲线测定 | 第53页 |
| 1.2.4 QD1 菌株产酶曲线的测定 | 第53页 |
| 1.2.5 培养基中壳聚糖成分的研究 | 第53-54页 |
| 1.2.6 发酵碳源优化 | 第54页 |
| 1.2.7 发酵氮源优化 | 第54页 |
| 1.2.8 液体培养基中缓冲体系（K_2HPO_4-KH_2PO_4）对产酶的影响 | 第54页 |
| 1.2.9 Mn~(2+)对菌株产酶的影响 | 第54-55页 |
| 2. 结果与分析 | 第55-61页 |
| 2.1 菌株最适产酶培养温度研究 | 第55页 |
| 2.2 QD1 菌株生长曲线测定 | 第55-56页 |
| 2.3 QD1 菌株产酶曲线的测定时间 | 第56-57页 |
| 2.4 培养基中壳聚糖成分的研究 | 第57-58页 |
| 2.5 发酵碳源优化 | 第58页 |
| 2.6 发酵氮源优化 | 第58-59页 |
| 2.7 液体培养基中缓冲体系（K_2HPO_4-KH_2PO_4）对产酶的影响 | 第59-60页 |
| 2.8 Mn~(2+)对菌株产酶的影响 | 第60-61页 |
| 3. 小结与讨论 | 第61-63页 |
| 第五章 Renibacterium sp. QD1 壳聚糖酶基因 csn-A 的克隆与序列分析 | 第63-80页 |
| 1 材料与方法 | 第63-69页 |
| 1.1 材料与仪器 | 第63-64页 |
| 1.1.1 试剂 | 第63页 |
| 1.1.2 菌种、质粒和培养基 | 第63页 |
| 1.1.3 仪器 | 第63-64页 |
| 1.2 实验方法与步骤 | 第64-69页 |
| 1.2.1 构建基因文库的方法（鸟枪法）原理 | 第64-65页 |
| 1.2.2 基因组的提取 | 第65页 |
| 1.2.3 DNA 的片段化 | 第65-66页 |
| 1.2.4 酶切片段的回收纯化 | 第66页 |
| 1.2.5 载体的选择与制备 | 第66-67页 |
| 1.2.6 DNA 片段与载体的连接 | 第67页 |
| 1.2.7 Escherichia coli DH5α感受态细胞的制备 | 第67页 |
| 1.2.8 重组载体的转化 | 第67-68页 |
| 1.2.9 阳性克隆的功能筛选 | 第68页 |
| 1.2.10 不同浓度壳聚糖对 DH5α的生长抑制 | 第68页 |
| 1.2.11 引物合成与 DNA 测序 | 第68页 |
| 1.2.12 蛋白质测序 | 第68-69页 |
| 2 实验结果与讨论 | 第69-78页 |
| 2.1 基因文库的构建 | 第69-72页 |
| 2.1.1 基因组的提取 | 第69页 |
| 2.1.2 DNA 的片段化 | 第69-71页 |
| 2.1.3 质粒提取 | 第71页 |
| 2.1.4 质粒的酶切和回收纯化 | 第71-72页 |
| 2.1.5 转化细胞的筛选 | 第72页 |
| 2.2 蛋白质 N 端测序 | 第72-77页 |
| 2.2.1 壳聚糖纯酶 Csn-A 的纯度检测 | 第72-74页 |
| 2.2.2 蛋白质 N 端测序结果 | 第74-77页 |
| 2.3 PCR 结果与测序 | 第77-78页 |
| 2.3.1 PCR 电泳结果 | 第77-78页 |
| 2.3.2 测序结果与分析 | 第78页 |
| 2.4 由核苷酸翻译成氨基酸及信号肽的预测 | 第78页 |
| 3 小结与讨论 | 第78-80页 |
| 总结与展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-84页 |
| 附录 | 第84-96页 |
| 附录 1 常用培养基的配制方法 | 第84-86页 |
| 附录 2 常用试剂、溶液的配制方法 | 第86-91页 |
| 附录 3 常用分子生物学实验方法 | 第91-95页 |
| 附录 4 缩略词汇总 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-97页 |
| 个人简历 | 第97页 |
| 发表的学术论文 | 第97页 |
| 申请专利 | 第97-98页 |
