| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 上篇 文献综述 | 第12-27页 |
| 稻瘟病菌与过氧化物酶体 | 第13-23页 |
| 1 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第13页 |
| 2 稻瘟病菌的侵染循环 | 第13-15页 |
| 2.1 孢子萌发 | 第14页 |
| 2.2 附着胞的分化与形成 | 第14-15页 |
| 2.3 侵染栓的形成与侵入 | 第15页 |
| 2.4 侵入后菌丝分化与扩展 | 第15页 |
| 2.5 产孢与再侵染 | 第15页 |
| 3 稻瘟病菌致病性的相关基因 | 第15-17页 |
| 3.1 分生孢子产生相关基因 | 第15-16页 |
| 3.2 与稻瘟病菌附着胞分化和成熟相关的基因 | 第16-17页 |
| 4 过氧化物酶体 | 第17-19页 |
| 4.1 过氧化物酶体的合成 | 第17-18页 |
| 4.2 过氧化物酶体基质蛋白的输入 | 第18页 |
| 4.3 过氧化物酶体膜蛋白的输入 | 第18-19页 |
| 4.4 过氧化物酶体的增殖 | 第19页 |
| 5 过氧化物酶体与真菌的致病性 | 第19-20页 |
| 5.1 过氧化物酶体与脂肪酸的B-氧化 | 第20页 |
| 5.2 脂肪酸B-氧化对病原真菌的影响 | 第20页 |
| 6 本研究的目的与意义 | 第20-23页 |
| 参考文献 | 第23-27页 |
| 下篇 研究内容 | 第27-58页 |
| MOPEX7与MOPEX20的基因双敲除及突变体表型分析 | 第28-56页 |
| 1 实验材料 | 第28-32页 |
| 1.1 菌株与寄主植物 | 第28页 |
| 1.2 试剂 | 第28-29页 |
| 1.3 仪器 | 第29页 |
| 1.4 培养基 | 第29-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-39页 |
| 2.1 敲除载体的构建 | 第32-35页 |
| 2.1.1 PCR目标片段的扩增 | 第32-33页 |
| 2.1.2 凝胶琼脂糖电泳 | 第33页 |
| 2.1.3 PCR胶回收(DNA片段) | 第33页 |
| 2.1.4 骨架与片段的链接 | 第33-34页 |
| 2.1.5 大肠杆菌转化 | 第34页 |
| 2.1.6 小剂量DNA剂量的提取 | 第34页 |
| 2.1.7 酶切验证 | 第34-35页 |
| 2.2 农杆菌转化 | 第35页 |
| 2.3 转化子的获得(ATMT转化) | 第35-36页 |
| 2.4 转化子的验证 | 第36页 |
| 2.5 转化子的保存与菌株培养 | 第36页 |
| 2.6 表型分析 | 第36-39页 |
| 2.6.1 菌落生长速度 | 第36页 |
| 2.6.2 产孢量测定 | 第36页 |
| 2.6.3 孢子萌发与附着胞的形成 | 第36-37页 |
| 2.6.4 黑色素的测定 | 第37页 |
| 2.6.5 大麦离体喷雾 | 第37页 |
| 2.6.6 水稻离体喷雾 | 第37页 |
| 2.6.7 大麦菌丝块接种 | 第37-38页 |
| 2.6.8 大麦菌丝接种 | 第38页 |
| 2.6.9 侵染情况测定 | 第38页 |
| 2.6.10 分生孢子的脂肪粒染色 | 第38页 |
| 2.6.11 碳源利用 | 第38页 |
| 2.6.12 细胞壁完整性及活性氧的耐受性的测定 | 第38-39页 |
| 2.7 PTS1和PTS2相关蛋白的定位 | 第39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-53页 |
| 3.1 PEX20和PEX7基因双敲突变体的获得 | 第39-40页 |
| 3.2 突变体仅影响PTS2蛋白的定位 | 第40-41页 |
| 3.3 突变体表型差异分析 | 第41-52页 |
| 3.3.1 双敲突变体气生菌丝变稀薄 | 第41-43页 |
| 3.3.2 突变体产孢量下降 | 第43页 |
| 3.3.3 突变体孢子萌发率及附着胞形成率下降 | 第43-44页 |
| 3.3.4 突变体附着的彭压降低 | 第44-45页 |
| 3.3.5 突变体造成脂肪转运速度下降 | 第45-46页 |
| 3.3.6 突变体黑色素产量下降 | 第46-47页 |
| 3.3.7 突变体致病性下降 | 第47-48页 |
| 3.3.8 突变体在大麦叶片中的侵染菌丝量少 | 第48-49页 |
| 3.3.9 突变体的脂肪酸利用率下降 | 第49-50页 |
| 3.3.10 突变体的细胞壁完整性存在缺陷 | 第50-51页 |
| 3.3.11 突变体对活性氧的耐受性减弱 | 第51-52页 |
| 3.4 功能差异分析 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 参考文献 | 第56-58页 |
| 附录1 缓冲液配方 | 第58-59页 |
| 附录2 农杆菌感受态的制备与转化 | 第59-60页 |
| 附录3 cTAB法提取基因组DNA | 第60-61页 |
| 附录4 TRIZOL法提取真菌总RNA及反转录 | 第61-63页 |
| 附录5 REAL-TIME PCR方法(SYBR GREEN嵌合荧光法) | 第63-64页 |
| 附录6 稻瘟病菌ATMT转化 | 第64-65页 |
| 附录7 缩略词 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |