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嗅觉受体Orco与家蚕摄食性的关系

中文摘要第8-10页
Abstract第10-11页
1 前言第12-20页
    1.1 家蚕的食性第12-13页
        1.1.1 家蚕的食性特点第12页
        1.1.2 家蚕食性的分子研究第12页
        1.1.3 家蚕食性的遗传方式研究第12-13页
    1.2 昆虫的嗅觉感受机制第13-14页
        1.2.1 昆虫的嗅觉感受器第13-14页
        1.2.2 昆虫的嗅觉识别过程第14页
    1.3 昆虫嗅觉受体概述第14-15页
    1.4 非典型嗅觉受体Orco的研究进展第15-18页
        1.4.1 Orco的表达第15-16页
        1.4.2 Orco的结构第16-17页
        1.4.3 Orco的功能第17-18页
        1.4.4 家蚕嗅觉受体Orco的研究进展第18页
    1.5 本研究的目的意义第18-20页
2 材料与方法第20-40页
    2.1 材料第20-26页
        2.1.1 实验动物第20页
        2.1.2 质粒和菌株第20页
        2.1.3 生化试剂第20-25页
            2.1.3.1 试剂及试剂盒第20-21页
            2.1.3.2 主要试剂的配制第21-25页
        2.1.4 PCR引物第25页
        2.1.5 主要软件和数据库第25页
        2.1.6 主要仪器设备第25-26页
    2.2 方法第26-40页
        2.2.1 Orco基因的克隆第26-31页
            2.2.1.1 取材第26页
            2.2.1.2 总RNA的提取第26-27页
            2.2.1.3 cDNA第一链的合成第27-28页
            2.2.1.4 PCR扩增第28页
            2.2.1.5 DNA片段的琼脂糖凝胶回收第28-29页
            2.2.1.6 连接反应第29页
            2.2.1.7 连接产物的转化第29页
            2.2.1.8 重组质粒的筛选与测序第29-30页
            2.2.1.9 序列比对第30页
            2.2.1.10 质粒提取第30-31页
        2.2.2 qPCR第31-32页
            2.2.2.1 总RNA提取第31页
            2.2.2.2 RNA纯度及浓度检测第31页
            2.2.2.3 cDNA第一条链的合成第31页
            2.2.2.4 引物设计第31页
            2.2.2.5 qPCR反应体系及程序第31-32页
            2.2.2.6 qPCR第32页
        2.2.3 小鼠抗BmOrco多克隆抗体的制备第32-38页
            2.2.3.1 抗原片段的选择与PCR扩增第32页
            2.2.3.2 原核表达载体的构建第32-34页
            2.2.3.3 重组质粒的原核表达第34页
            2.2.3.4 SDS-PAGE电泳第34-35页
            2.2.3.5 包涵体蛋白的变性纯化第35-37页
            2.2.3.6 动物免疫第37页
            2.2.3.7 ELISA第37页
            2.2.3.8 Western blot第37-38页
        2.2.4 抗体染色第38-40页
3 结果与分析第40-50页
    3.1 不同摄食性家蚕品种Orco基因的核苷酸组成比较第40-41页
        3.1.1 Orco基因的PCR扩增第40页
        3.1.2 阳性克隆菌的鉴定第40-41页
        3.1.3 Orco基因核苷酸组成比较第41页
    3.2 不同摄食性家蚕品种Orco基因的mRNA表达水平比较第41-43页
        3.2.1 不同摄食性家蚕品种Orco基因的表达水平比较第41-42页
        3.2.2 食性改良家蚕品种与其亲代Orco基因的表达水平比较第42-43页
    3.3 不同摄食性家蚕品种Orco蛋白表达水平的比较第43-48页
        3.3.1 抗体制备第43-46页
            3.3.1.1 抗体用片段的选择及克隆第43-44页
            3.3.1.2 原核表达载体的构建第44页
            3.3.1.3 Orco蛋白的诱导表达及变性纯化第44-45页
            3.3.1.4 小鼠多克隆抗体效价的检测第45-46页
        3.3.2 Orco在家蚕幼虫的蛋白定位第46-47页
        3.3.3 不同摄食性家蚕Orco蛋白水平的表达差异第47-48页
    3.4 饥饿对Orco基因表达量的影响第48-50页
4 讨论第50-53页
    4.1 昆虫Orco蛋白的原核表达第50-51页
    4.2 Orco的蛋白定位第51页
    4.3 不同摄食性家蚕Orco的表达差异第51-52页
    4.4 Orco在家蚕育种上的应用第52页
    4.5 饥饿对Orco基因表达量的影响第52-53页
5 结论第53-54页
参考文献第54-62页
致谢第62-63页
攻读学位期间发表论文情况第63页

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