| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 引言 | 第9-18页 |
| 1.1 p53研究进展 | 第9-10页 |
| 1.1.1 p53基因概述 | 第9页 |
| 1.1.2 p53基因编码产物及其结构 | 第9-10页 |
| 1.2 p53基因与癌症的关系 | 第10-13页 |
| 1.2.1 p53基因与肿瘤治疗 | 第10-11页 |
| 1.2.2 癌症中常见的p53基因突变 | 第11页 |
| 1.2.3 p53基因突变与肝癌诊断 | 第11-12页 |
| 1.2.4 p53蛋白细胞定位与癌症 | 第12页 |
| 1.2.5 影响p53蛋白细胞定位的因子 | 第12-13页 |
| 1.3 p53与细胞凋亡 | 第13-15页 |
| 1.3.1 细胞凋亡概述 | 第13-14页 |
| 1.3.2 p53参与的细胞凋亡途径 | 第14-15页 |
| 1.4 p53与线粒体凋亡途径的关系 | 第15-17页 |
| 1.4.1 线粒体研究概述 | 第15页 |
| 1.4.2 p53与线粒体凋亡途径 | 第15-16页 |
| 1.4.3 影响p53线粒体转位的因素 | 第16-17页 |
| 1.5 本课题主要研究内容及创新之处 | 第17-18页 |
| 1.5.1 主要研究内容 | 第17页 |
| 1.5.2 本课题的特色与创新之处 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 菌株和细胞株 | 第18页 |
| 2.1.2 主要仪器设备及试剂 | 第18-20页 |
| 2.1.3 常用溶液配制 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-34页 |
| 2.2.1 重组质粒构建 | 第21-25页 |
| 2.2.1.1 目的基因PCR扩增 | 第21-23页 |
| 2.2.1.2 构建重组质粒 | 第23-25页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第25-26页 |
| 2.2.2.1 细胞复苏、传代培养及保种 | 第26页 |
| 2.2.2.2 细胞计数 | 第26页 |
| 2.2.3 稳定转染细胞株构建 | 第26-27页 |
| 2.2.3.1 无内毒素质粒提取 | 第26页 |
| 2.2.3.2 细胞转染 | 第26-27页 |
| 2.2.3.3 转染后筛选 | 第27页 |
| 2.2.4 MTT细胞活力检测、耐药实验 | 第27页 |
| 2.2.5 细胞免疫荧光 | 第27-28页 |
| 2.2.6 细胞凋亡检测 | 第28页 |
| 2.2.7 蛋白质免疫印迹(Western Blot) | 第28-31页 |
| 2.2.7.1 细胞总蛋白提取 | 第28页 |
| 2.2.7.2 BCA法测蛋白定量 | 第28-29页 |
| 2.2.7.3 蛋白质电泳(SDS-PAGE) | 第29-30页 |
| 2.2.7.4 免疫印迹 | 第30-31页 |
| 2.2.8 裸鼠肿瘤实验 | 第31-34页 |
| 2.2.8.1 动物模型及药物注射 | 第31页 |
| 2.2.8.2 组织石蜡包埋 | 第31页 |
| 2.2.8.3 组织免疫组化 | 第31-32页 |
| 2.2.8.4 免疫组化双染 | 第32页 |
| 2.2.8.5 HE染色 | 第32-34页 |
| 第三章 结果分析 | 第34-63页 |
| 3.1 mtp53稳定转染细胞株的构建 | 第34-36页 |
| 3.2 环境压力下p53蛋白对癌细胞的保护作用 | 第36-40页 |
| 3.2.1 不同环境压力下wtp53、mtp53对癌细胞的增殖活性影响的比较 | 第36-38页 |
| 3.2.2 氧化应激条件下wtp53和mtp53对癌细胞凋亡的影响 | 第38-40页 |
| 3.3 环境压力可诱发癌细胞中p53蛋白亚细胞定位发生变化 | 第40-48页 |
| 3.3.1 p53蛋白在核质中的表达量发生明显变化 | 第40-46页 |
| 3.3.2 p53(phosphor-ser15)蛋白脱磷酸化后从胞核转移到胞质中 | 第46-48页 |
| 3.4 p53蛋白与线粒体的关系 | 第48-52页 |
| 3.4.1 癌细胞中p53蛋白与线粒体的亚细胞定位关系 | 第49-50页 |
| 3.4.2 p53蛋白可结合线粒体基因 | 第50-52页 |
| 3.5 癌细胞中mtND_2过表达对细胞生长的调节作用 | 第52-54页 |
| 3.5.1 mtND_2稳定转染细胞株的构建 | 第52-53页 |
| 3.5.2 mtND_2可促使细胞凋亡 | 第53页 |
| 3.5.3 mtND_2可调节细胞增殖活性 | 第53-54页 |
| 3.6 裸鼠体内wtp53和mtp53肿瘤受抗癌药物影响的比较 | 第54-63页 |
| 3.6.1 裸鼠种植肿瘤的抗药性对比 | 第54-58页 |
| 3.6.2 wtp53和mtp53肿瘤增殖能力及转移能力的比较 | 第58-63页 |
| 第四章 结论与展望 | 第63-65页 |
| 4.1 结论 | 第63-64页 |
| 4.2 展望 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70-76页 |
| 个人简历 | 第76页 |
