| 摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-26页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌 | 第11-12页 |
| 1.2 苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白 | 第12-15页 |
| 1.2.1 杀虫晶体蛋白的类型 | 第12页 |
| 1.2.2 杀虫晶体蛋白的作用机理 | 第12-14页 |
| 1.2.3 杀虫晶体蛋白的应用 | 第14-15页 |
| 1.3 营养期杀虫蛋白 | 第15-22页 |
| 1.3.1 营养期杀虫蛋白的分类 | 第15-17页 |
| 1.3.2 营养期杀虫蛋白的作用机理 | 第17-22页 |
| 1.3.3 营养期杀虫蛋白的应用前景 | 第22页 |
| 1.4 杀虫蛋白的鉴定方法 | 第22-24页 |
| 1.4.1 PCR-RFLP鉴定 | 第22页 |
| 1.4.2 分子杂交鉴定 | 第22-23页 |
| 1.4.3 蛋白鉴定 | 第23页 |
| 1.4.4 HRM检测方法 | 第23-24页 |
| 1.4.5 PCR-HTS检测方法 | 第24页 |
| 1.5 重要农业害虫 | 第24-25页 |
| 1.5.1 甜菜蛾 | 第24页 |
| 1.5.2 棉铃虫 | 第24-25页 |
| 1.6 本研究的立题依据和目的意义 | 第25-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-32页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第26页 |
| 2.1.2 化学试剂及酶试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 培养基 | 第27页 |
| 2.1.4 抗生素 | 第27页 |
| 2.1.5 常见溶液和缓冲液 | 第27-31页 |
| 2.1.6 供试昆虫 | 第31页 |
| 2.1.7 仪器设备 | 第31-32页 |
| 2.1.8 标准分子量 | 第32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-40页 |
| 2.2.1 菌株的分离 | 第32-33页 |
| 2.2.2 晶体形态观察 | 第33页 |
| 2.2.3 Bt基因组的提取 | 第33页 |
| 2.2.4 引物设计 | 第33页 |
| 2.2.5 PCR扩增 | 第33-34页 |
| 2.2.6 酶切反应 | 第34-35页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第35页 |
| 2.2.8 DNA胶回收 | 第35页 |
| 2.2.9 重组反应 | 第35页 |
| 2.2.10 E.coli感受态细胞制备 | 第35-36页 |
| 2.2.11 热击转化 | 第36页 |
| 2.2.12 大肠杆菌质粒的提取 | 第36页 |
| 2.2.13 vip3Aa基因在E.coli中诱导表达 | 第36-37页 |
| 2.2.14 Ni-Agarose His标签蛋白亲和层析蛋白质 | 第37页 |
| 2.2.15 SDS-PAGE电泳 | 第37页 |
| 2.2.16 蛋白定量的方法 | 第37-38页 |
| 2.2.17 杀虫活性测定及数据处理 | 第38页 |
| 2.2.18 石蜡切片 | 第38-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-49页 |
| 3.1 Bt菌株的分离鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2 vip3类基因的鉴定 | 第41-43页 |
| 3.2.1 vip3基因的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.2.2 vip3Aa基因的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3 vip3Aa类基因的克隆表达及序列分析 | 第43-44页 |
| 3.4 Vip3Aa蛋白的纯化 | 第44-45页 |
| 3.5 室内杀虫活性测定 | 第45-47页 |
| 3.5.1 初筛 | 第45-46页 |
| 3.5.2 复筛 | 第46-47页 |
| 3.6 石蜡切片 | 第47-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第60页 |