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动点蛋白CSPP1和Bubin的功能研究

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
第一章 绪论第11-54页
    1.1 有丝分裂概述第11-32页
        1.1.1 有丝分裂的周期进程第11-13页
        1.1.2 姐妹染色单体的连接第13-20页
        1.1.3 动点的结构基础第20-25页
        1.1.4 中心体的结构与周期第25-32页
    1.2 纺锤体第32-43页
        1.2.1 纺锤体的组装第32-37页
        1.2.2 动点-微管连接第37-41页
        1.2.3 动点微管动态性调控第41-43页
    1.3 纺锤体组装检验点第43-54页
        1.3.1 SAC的功能概述第45-49页
        1.3.2 SAC蛋白动点定位第49-52页
        1.3.3 SAC失活的机制第52-54页
第二章 材料与方法第54-72页
    2.1 实验材料第54-57页
        2.1.1 细胞株第54页
        2.1.2 载体第54页
        2.1.3 构建的质粒第54-55页
        2.1.4 抗体第55页
        2.1.5 试剂材料第55-57页
    2.2 实验方法第57-72页
        2.2.1 E.coli感受态细胞制作方法第57页
        2.2.2 通过PCR扩增基因以及产物回收方法第57-59页
        2.2.3 DNA片段重组第59页
        2.2.4 质粒转化第59-60页
        2.2.5 抽提小量的质粒DNA第60页
        2.2.6 试剂盒抽提质粒DNA的方法第60-61页
        2.2.7 制备用于蛋白表达的E.coli感受态细胞第61页
        2.2.8 谷胱苷肽(GST)融合蛋白的表达纯化第61-63页
        2.2.9 His融合蛋白的表达和纯化第63页
        2.2.10 GST pull- down第63-64页
        2.2.11 免疫共沉淀实验第64-65页
        2.2.12 免疫印迹实验第65页
        2.2.13 免疫印迹膜重复利用第65-66页
        2.2.14 体外磷酸化反应实验第66页
        2.2.15 质谱鉴定相互作用蛋白以及蛋白质的磷酸化位点第66页
        2.2.16 OD360检测(EnzChek~(?) Phosphate Assay Kit)第66-67页
        2.2.17 磷酸钙法转染第67-68页
        2.2.18 脂质体转染质粒第68页
        2.2.19 脂质体转染siRNA第68-69页
        2.2.20 细胞同步化的方法第69-70页
        2.2.21 染色体甩片第70页
        2.2.22 免疫荧光实验第70-71页
        2.2.23 活细胞成像第71页
        2.2.24 细胞的冷处理实验第71-72页
第三章 CSPP1调控有丝分裂期动点微管的动态性第72-124页
    3.1 引言第72-76页
    3.2 实验结果第76-118页
        3.2.1 CSPP1是一个新的动点蛋白第76-83页
        3.2.2 Aurora B凋控CSPP1的动点定位第83-88页
        3.2.3 CSPP1与CENP-H结合定位在动点上第88-97页
        3.2.4 CSPP1凋节正常的有丝分裂进程第97-102页
        3.2.5 抑制CSPP1表达影响纺锤体检验点失活第102-106页
        3.2.6 CSPP1调控染色体的摆动第106-113页
        3.2.7 CSPP1与MCAK协同调控染色体的摆动第113-118页
    3.3 讨论及CSPP1的作用模型第118-121页
    3.4 展望第121-124页
第四章 Bubin的功能探索第124-156页
    4.1 引言第124-125页
    4.2 实验结果和讨论第125-154页
        4.2.1 Bubin的发现第125-130页
        4.2.2 Bubin是一个新的动点蛋白第130-133页
        4.2.3 Bubin调控正常的有丝分裂进程第133-140页
        4.2.4 Bubin维持姐妹染色单体之间的连接第140-142页
        4.2.5 Bubin介导动点蛋白的正常定位第142-145页
        4.2.6 Bubin调控Bub1的激酶活性第145-148页
        4.2.7 Bubin调控Aurora B-Mps1-Bub1环路第148-154页
    4.3 展望第154-156页
参考文献第156-175页
致谢第175-176页
在读期间发表的学术论文与参加的会议第176页

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