| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-36页 |
| 1.1 手性化合物简介 | 第12页 |
| 1.2 手性环氧氯丙烷简介及生产方法 | 第12-15页 |
| 1.2.1 化学法生产手性环氧氯丙烷 | 第12-13页 |
| 1.2.2 生物法生产手性环氧氯丙烷 | 第13-15页 |
| 1.2.2.1 生物法拆分 | 第14页 |
| 1.2.2.2 生物法不对称合成 | 第14-15页 |
| 1.3 环氧化物水解酶 | 第15-21页 |
| 1.4 环氧化物水解酶的分离纯化简介[74-78] | 第21-24页 |
| 1.4.1 细胞破碎 | 第21-22页 |
| 1.4.2 酶的抽提 | 第22-23页 |
| 1.4.3 酶的精制 | 第23-24页 |
| 1.5 环氧化物水解酶的固定化简介[82-84] | 第24-26页 |
| 1.6 本论文的研究内容 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-36页 |
| 第二章 环氧化物水解酶的产酶条件研究 | 第36-53页 |
| 2.1 引言 | 第36-37页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第37-40页 |
| 2.2.1 菌种 | 第37页 |
| 2.2.2 试剂 | 第37页 |
| 2.2.3 主要实验仪器 | 第37-38页 |
| 2.2.4 培养基 | 第38页 |
| 2.2.5 菌体培养 | 第38页 |
| 2.2.6 酶活定义 | 第38页 |
| 2.2.7 转化 | 第38页 |
| 2.2.8 生物量测定 | 第38-39页 |
| 2.2.9 环氧氯丙烷的分析检测 | 第39-40页 |
| 2.2.9.1 GC检测 | 第39页 |
| 2.2.9.2 手性GC检测 | 第39-40页 |
| 2.2.10 实验设计 | 第40页 |
| 2.2.11 正交试验的水平因子表 | 第40页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第40-51页 |
| 2.3.1 碳源的筛选 | 第40-41页 |
| 2.3.2 不同淀粉/柠檬酸钠比例对菌体生长和产酶的影响 | 第41-42页 |
| 2.3.3 氮源的筛选 | 第42-43页 |
| 2.3.4 不同酵母浸出汁/牛肉膏比例对菌体生长和产酶的影响 | 第43-44页 |
| 2.3.5 金属离子对菌体生长和产酶的影响 | 第44页 |
| 2.3.6 添加醇类、三元环类化合物对菌体生长和产酶的影响 | 第44-45页 |
| 2.3.7 诱导剂浓度对菌体生长及产酶的影响 | 第45-46页 |
| 2.3.8 正交试验优化培养基 | 第46-47页 |
| 2.3.9 接种量对菌体生长及其产酶的影响 | 第47-48页 |
| 2.3.10 起始pH对菌体生长及其产酶的影响 | 第48-49页 |
| 2.3.11 装液量对菌体生长及其产酶的影响 | 第49-50页 |
| 2.3.12 菌体生长曲线和产酶曲线的测定 | 第50-51页 |
| 2.4 本章小结 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-53页 |
| 第三章 环氧化物水解酶的分离纯化及鉴定 | 第53-67页 |
| 3.1 引言 | 第53-54页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第54-58页 |
| 3.2.1 菌种与培养基 | 第54页 |
| 3.2.2 主要仪器和试剂 | 第54-55页 |
| 3.2.2.1 主要仪器 | 第54页 |
| 3.2.2.2 主要试剂 | 第54-55页 |
| 3.2.3 静息细胞的制备 | 第55页 |
| 3.2.4 Bradford法测定蛋白质浓度 | 第55-56页 |
| 3.2.4.1 考马斯亮蓝G-250溶液配制 | 第55页 |
| 3.2.4.2 标准蛋白溶液配制 | 第55页 |
| 3.2.4.3 蛋白质标准曲线绘制 | 第55-56页 |
| 3.2.5 菌体的破碎 | 第56页 |
| 3.2.6 硫酸铵沉淀 | 第56-57页 |
| 3.2.7 脱盐 | 第57页 |
| 3.2.8 离子交换层析柱纯化 | 第57页 |
| 3.2.9 SDS-PAGE进行目的蛋白分析 | 第57页 |
| 3.2.10 酶的鉴定 | 第57-58页 |
| 3.2.10.1 肽指纹谱图分析 | 第57-58页 |
| 3.2.10.2 酶的N端序列分析 | 第58页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第58-65页 |
| 3.3.1 超声波破碎 | 第58-59页 |
| 3.3.2 硫酸铵沉淀 | 第59页 |
| 3.3.3 脱盐 | 第59-60页 |
| 3.3.4 纯化结果 | 第60-62页 |
| 3.3.5 酶的鉴定 | 第62-65页 |
| 3.3.5.1 肽指纹谱图分析 | 第62-65页 |
| 3.3.5.2 蛋白质的N端序列测定 | 第65页 |
| 3.4 本章小结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-67页 |
| 第四章 固定化环氧化物水解酶有机相中拆分环氧氯丙烷 | 第67-81页 |
| 4.1 引言 | 第67-68页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第68-69页 |
| 4.2.1 菌种 | 第68页 |
| 4.2.2 培养基及试剂 | 第68页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第68页 |
| 4.2.4 培养条件 | 第68页 |
| 4.2.5 菌体的破碎 | 第68页 |
| 4.2.6 粗酶粉的制备 | 第68-69页 |
| 4.2.7 酶的固定化 | 第69页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第69-79页 |
| 4.3.1 有机溶剂对催化反应的得率和对映选择性的影响 | 第69-70页 |
| 4.3.2 载体和酶比例对固定化效果的影响 | 第70页 |
| 4.3.3 固定化时间对酶活的影响 | 第70页 |
| 4.3.4 固定化酶量对比酶活的影响 | 第70-71页 |
| 4.3.5 温度对酶活性的影响 | 第71-72页 |
| 4.3.6 pH对酶活性的影响 | 第72-73页 |
| 4.3.7 体系初始水含量对酶活的影响 | 第73-74页 |
| 4.3.8 不同底物浓度对拆分ECH的影响 | 第74-75页 |
| 4.3.9 固定化酶手性拆分ECH | 第75页 |
| 4.3.10 反应批次 | 第75-77页 |
| 4.3.11 反应动力学 | 第77-79页 |
| 4.3.11.1 底物浓度对初始反应速率的影响 | 第77-78页 |
| 4.3.11.2 产物浓度对初始反应速率的影响 | 第78-79页 |
| 4.4 本章小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-81页 |
| 第五章 结论与展望 | 第81-83页 |
| 5.1 结论 | 第81-82页 |
| 5.2 展望 | 第82-83页 |
| 附录1 本文所用到的缓冲液配方 | 第83-84页 |
| 附录2 蛋白质N端序列测定图谱 | 第84-85页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
