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环氧化物水解酶的生产及其在环氧氯丙烷手性拆分中的应用

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-8页
第一章 绪论第12-36页
    1.1 手性化合物简介第12页
    1.2 手性环氧氯丙烷简介及生产方法第12-15页
        1.2.1 化学法生产手性环氧氯丙烷第12-13页
        1.2.2 生物法生产手性环氧氯丙烷第13-15页
            1.2.2.1 生物法拆分第14页
            1.2.2.2 生物法不对称合成第14-15页
    1.3 环氧化物水解酶第15-21页
    1.4 环氧化物水解酶的分离纯化简介[74-78]第21-24页
        1.4.1 细胞破碎第21-22页
        1.4.2 酶的抽提第22-23页
        1.4.3 酶的精制第23-24页
    1.5 环氧化物水解酶的固定化简介[82-84]第24-26页
    1.6 本论文的研究内容第26-27页
    参考文献第27-36页
第二章 环氧化物水解酶的产酶条件研究第36-53页
    2.1 引言第36-37页
    2.2 实验材料和方法第37-40页
        2.2.1 菌种第37页
        2.2.2 试剂第37页
        2.2.3 主要实验仪器第37-38页
        2.2.4 培养基第38页
        2.2.5 菌体培养第38页
        2.2.6 酶活定义第38页
        2.2.7 转化第38页
        2.2.8 生物量测定第38-39页
        2.2.9 环氧氯丙烷的分析检测第39-40页
            2.2.9.1 GC检测第39页
            2.2.9.2 手性GC检测第39-40页
        2.2.10 实验设计第40页
        2.2.11 正交试验的水平因子表第40页
    2.3 实验结果与讨论第40-51页
        2.3.1 碳源的筛选第40-41页
        2.3.2 不同淀粉/柠檬酸钠比例对菌体生长和产酶的影响第41-42页
        2.3.3 氮源的筛选第42-43页
        2.3.4 不同酵母浸出汁/牛肉膏比例对菌体生长和产酶的影响第43-44页
        2.3.5 金属离子对菌体生长和产酶的影响第44页
        2.3.6 添加醇类、三元环类化合物对菌体生长和产酶的影响第44-45页
        2.3.7 诱导剂浓度对菌体生长及产酶的影响第45-46页
        2.3.8 正交试验优化培养基第46-47页
        2.3.9 接种量对菌体生长及其产酶的影响第47-48页
        2.3.10 起始pH对菌体生长及其产酶的影响第48-49页
        2.3.11 装液量对菌体生长及其产酶的影响第49-50页
        2.3.12 菌体生长曲线和产酶曲线的测定第50-51页
    2.4 本章小结第51-52页
    参考文献第52-53页
第三章 环氧化物水解酶的分离纯化及鉴定第53-67页
    3.1 引言第53-54页
    3.2 实验材料和方法第54-58页
        3.2.1 菌种与培养基第54页
        3.2.2 主要仪器和试剂第54-55页
            3.2.2.1 主要仪器第54页
            3.2.2.2 主要试剂第54-55页
        3.2.3 静息细胞的制备第55页
        3.2.4 Bradford法测定蛋白质浓度第55-56页
            3.2.4.1 考马斯亮蓝G-250溶液配制第55页
            3.2.4.2 标准蛋白溶液配制第55页
            3.2.4.3 蛋白质标准曲线绘制第55-56页
        3.2.5 菌体的破碎第56页
        3.2.6 硫酸铵沉淀第56-57页
        3.2.7 脱盐第57页
        3.2.8 离子交换层析柱纯化第57页
        3.2.9 SDS-PAGE进行目的蛋白分析第57页
        3.2.10 酶的鉴定第57-58页
            3.2.10.1 肽指纹谱图分析第57-58页
            3.2.10.2 酶的N端序列分析第58页
    3.3 实验结果与讨论第58-65页
        3.3.1 超声波破碎第58-59页
        3.3.2 硫酸铵沉淀第59页
        3.3.3 脱盐第59-60页
        3.3.4 纯化结果第60-62页
        3.3.5 酶的鉴定第62-65页
            3.3.5.1 肽指纹谱图分析第62-65页
            3.3.5.2 蛋白质的N端序列测定第65页
    3.4 本章小结第65-66页
    参考文献第66-67页
第四章 固定化环氧化物水解酶有机相中拆分环氧氯丙烷第67-81页
    4.1 引言第67-68页
    4.2 实验材料和方法第68-69页
        4.2.1 菌种第68页
        4.2.2 培养基及试剂第68页
        4.2.3 实验仪器第68页
        4.2.4 培养条件第68页
        4.2.5 菌体的破碎第68页
        4.2.6 粗酶粉的制备第68-69页
        4.2.7 酶的固定化第69页
    4.3 结果与讨论第69-79页
        4.3.1 有机溶剂对催化反应的得率和对映选择性的影响第69-70页
        4.3.2 载体和酶比例对固定化效果的影响第70页
        4.3.3 固定化时间对酶活的影响第70页
        4.3.4 固定化酶量对比酶活的影响第70-71页
        4.3.5 温度对酶活性的影响第71-72页
        4.3.6 pH对酶活性的影响第72-73页
        4.3.7 体系初始水含量对酶活的影响第73-74页
        4.3.8 不同底物浓度对拆分ECH的影响第74-75页
        4.3.9 固定化酶手性拆分ECH第75页
        4.3.10 反应批次第75-77页
        4.3.11 反应动力学第77-79页
            4.3.11.1 底物浓度对初始反应速率的影响第77-78页
            4.3.11.2 产物浓度对初始反应速率的影响第78-79页
    4.4 本章小结第79-80页
    参考文献第80-81页
第五章 结论与展望第81-83页
    5.1 结论第81-82页
    5.2 展望第82-83页
附录1 本文所用到的缓冲液配方第83-84页
附录2 蛋白质N端序列测定图谱第84-85页
攻读学位期间发表的论文第85-86页
致谢第86页

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