| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 序言 | 第9-19页 |
| 1.1 我国天然橡产业面临的问题 | 第9-10页 |
| 1.2 高等植物启动子的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.2.1 植物基因启动子的一般特征 | 第10-11页 |
| 1.2.2 高等植物启动子的分类 | 第11-14页 |
| 1.3 橡胶树遗传转化的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3.1 农杆菌介导橡胶树的遗传转化研究 | 第14-15页 |
| 1.3.2 基因枪转化法在橡胶树遗传转化中的应用 | 第15-16页 |
| 1.4 橡胶树HbHEV2.1启动子(PHEV2.1)的研究进展 | 第16页 |
| 1.5 橡胶树HbHMGR的研究进展 | 第16-17页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第17-18页 |
| 1.7 技术路线 | 第18-19页 |
| 2 实验材料和方法 | 第19-37页 |
| 2.1 植物材料与试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第19页 |
| 2.1.2 质粒载体与菌株 | 第19页 |
| 2.1.3 常用生化试剂和酶 | 第19页 |
| 2.1.4 橡胶树组织培养的条件 | 第19-20页 |
| 2.1.5 植物组织培养和遗传转化所用培养基 | 第20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-37页 |
| 2.2.1 橡胶树乳管特异性启动子PHEV2.1的克隆 | 第20-24页 |
| 2.2.2 HbHMGR1乳管特异性植物表达载体的构建 | 第24-29页 |
| 2.2.3 农杆菌介导植物表达载体pCAMBIA2301-PHEV2.1::HbHMGR/1转化橡胶树易碎胚性愈伤组织及其植株再生 | 第29-33页 |
| 2.2.4 拟转化植株的抗性愈伤组织的分子检测 | 第33-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-62页 |
| 3.1 乳管特异性启动子PHEV2.1的克隆 | 第37-41页 |
| 3.1.1 橡胶树优良品种热研7-33-97叶片基因组DNA的提取 | 第37页 |
| 3.1.2 橡胶树乳管特异性启动子PHEV2.1的PCR扩增 | 第37-38页 |
| 3.1.3 pMD19-T-PHEV2.1转化重组子的菌液PCR鉴定 | 第38页 |
| 3.1.4 PHEV2.1的测序与同源性比对分析 | 第38-40页 |
| 3.1.5 PHEV2.1的启动子元件比对分析 | 第40-41页 |
| 3.2 植物表达载体的构建 | 第41-44页 |
| 3.2.1 中间植物表达载体的鉴定 | 第41-43页 |
| 3.2.2 植物表达载体的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3 农杆菌介导植物表达载体pCAMBIA2301-PHEV2.1：：HbHMGR1转化橡胶树易碎胚性愈伤组织及其植株再生 | 第44-56页 |
| 3.3.1 植物表达载体pCAMBIA2301-PHEV2.1::HbHMGR1转化根癌农杆菌36 | 第44-45页 |
| 3.3.2 适宜抗生素使用浓度的确认 | 第45-47页 |
| 3.3.3 根癌农杆菌介导植物表达载体转化橡胶树易碎愈伤组织的条件优化 | 第47-52页 |
| 3.3.4 抗性愈伤组织筛选 | 第52-53页 |
| 3.3.5 抗性胚状体的诱导和植株再生 | 第53-55页 |
| 3.3.6 抗性胚状体和拟转化植株的GUS染色 | 第55-56页 |
| 3.4 拟转化植株的抗性愈伤组织的分子检测 | 第56-62页 |
| 3.4.1 拟转化植株的抗性愈伤组织的DNA提取 | 第56-57页 |
| 3.4.2 拟转化植株的抗性愈伤组织的PCR检测 | 第57-59页 |
| 3.4.3 转化材料的反向PCR(IPCR)检测 | 第59-62页 |
| 4 讨论 | 第62-68页 |
| 4.1 不同品种同源启动子的序列一致性 | 第62页 |
| 4.2 卡那霉素在橡胶树转基因中的应用 | 第62-63页 |
| 4.3 替卡西林在橡胶树转基因中的应用 | 第63页 |
| 4.4 关于转化条件对遗传转化效率的影响的讨论 | 第63-66页 |
| 4.4.1 预培养时间对转化效率的影响 | 第64页 |
| 4.4.2 菌液浓度对转化效率的影响 | 第64页 |
| 4.4.3 侵染时间对转化效率的影响 | 第64-65页 |
| 4.4.4 共培养时间对转化效率的影响 | 第65页 |
| 4.4.5 共培养温度对转化效率的影响 | 第65页 |
| 4.4.6 共培养pH对转化效率的影响 | 第65-66页 |
| 4.4.7 AS浓度对转化效率的影响 | 第66页 |
| 4.5 橡胶树乳管表达HbHMGR1基因双元表达载体的构建及转化橡胶树的意义及前景分析 | 第66-67页 |
| 4.6 反向PCR(IPCR)在转基因橡胶树鉴定中的应用讨论 | 第67-68页 |
| 5 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 缩略语表 | 第78-79页 |
| 论文发表情况 | 第79-80页 |
| 附表1 | 第80-81页 |
| 附表2 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
