| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第12-24页 |
| 1.1 课题的提出 | 第12页 |
| 1.2 MYB转录因子的研究进展 | 第12-20页 |
| 1.2.1 MYB转录因子的发现 | 第13页 |
| 1.2.2 MYB转录因子的结构特点与分类 | 第13-15页 |
| 1.2.3 MYB转录因子的生物学功能 | 第15-19页 |
| 1.2.4 MYB蛋白调控网络的研究 | 第19-20页 |
| 1.3 低温胁迫对植物的影响 | 第20-23页 |
| 1.3.1 低温胁迫对植物生理水平的影响 | 第20-21页 |
| 1.3.2 低温胁迫对植物分子水平的影响 | 第21-23页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-36页 |
| 2.1 低温胁迫下Cla007586的表达分析 | 第24-26页 |
| 2.1.1 植物材料培养及低温处理 | 第24页 |
| 2.1.2 CTAB法提取基因组DNA | 第24页 |
| 2.1.3 Trans Zol法提取基因组RNA | 第24-25页 |
| 2.1.4 反转录合成cDNA | 第25页 |
| 2.1.5 内参基因的选择和引物设计 | 第25页 |
| 2.1.6 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析 | 第25-26页 |
| 2.2 农杆菌介导Cla007586基因的烟草遗传转化 | 第26-28页 |
| 2.2.1 构建pHellsgate8-Cla007586植物过表达载体 | 第26页 |
| 2.2.2 制备农杆菌LBA4404感受态 | 第26-27页 |
| 2.2.3 转化农杆菌LBA4404感受态 | 第27页 |
| 2.2.4 农杆菌叶盘法介导转化栽培烟草 | 第27页 |
| 2.2.5 转基因烟草植株的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3 Cla007586过表达烟草植株的低温抗性鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.1 植物材料培养及低温处理 | 第28-29页 |
| 2.3.2 电导率的测定 | 第29页 |
| 2.3.3 丙二醛含量的测定 | 第29页 |
| 2.4 Cla007586的亚细胞定位 | 第29-31页 |
| 2.4.1 构建pK7FWG2-Cla007586表达载体 | 第30-31页 |
| 2.4.2 制备并转化农杆菌GV3101感受态 | 第31页 |
| 2.4.3 农杆菌介导转化本氏烟草及定位观察 | 第31页 |
| 2.5 Cla007586的互作蛋白筛选 | 第31-36页 |
| 2.5.0 构建西瓜叶片低温胁迫均一化cDNA文库 | 第31-32页 |
| 2.5.1 构建酵母诱饵载体 | 第32页 |
| 2.5.2 制备酵母感受态 | 第32-33页 |
| 2.5.3 转化酵母感受态 | 第33页 |
| 2.5.4 检测诱饵载体的自激活性 | 第33-34页 |
| 2.5.5 检测诱饵载体的毒性 | 第34页 |
| 2.5.6 Mating法酵母双杂交筛库 | 第34-35页 |
| 2.5.7 阳性菌斑测序结果分析 | 第35页 |
| 2.5.8 互作蛋白的点对点验证 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-51页 |
| 3.1 Cla007586基因的序列分析 | 第36-37页 |
| 3.2 Cla007586基因的表达分析 | 第37-39页 |
| 3.3 Cla007586的亚细胞定位 | 第39页 |
| 3.4 Cla007586过表达烟草植株的获得 | 第39-41页 |
| 3.5 Cla007586过表达烟草植株的低温抗性分析 | 第41-43页 |
| 3.5.1 转基因与野生型烟草低温处理下的表型差异 | 第41-42页 |
| 3.5.2 转基因与野生型烟草低温处理下细胞膜透性的变化 | 第42-43页 |
| 3.5.3 转基因与野生型烟草低温处理下丙二醛含量的变化 | 第43页 |
| 3.6 Cla007586互作蛋白的筛选及分析 | 第43-49页 |
| 3.6.1 诱饵载体pGBKT7-Cla007586的毒性效应 | 第43-44页 |
| 3.6.2 诱饵载体pGBKT7-Cla007586的自激活效应及AbA浓度筛选 | 第44-45页 |
| 3.6.3 诱饵载体与酵母文库双杂交筛选 | 第45-47页 |
| 3.6.4 杂交阳性菌斑的PCR鉴定及测序 | 第47页 |
| 3.6.5 阳性菌斑测序序列分析及功能预测 | 第47-49页 |
| 3.7 Cla007586候选互作蛋白的点对点验证 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-56页 |
| 4.1 Cla007586转录因子的表达及亚细胞定位 | 第51页 |
| 4.2 Cla007586转录因子的功能分析 | 第51-53页 |
| 4.3 Cla007586互作蛋白分析 | 第53-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| 附录Ⅰ：Mating阳性克隆测序序列 | 第66-72页 |
| 附录Ⅱ：常用培养基的配置 | 第72-73页 |
| 附录Ⅲ：硕士期间发表论文和申请专利 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
