| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 绪论 | 第10-23页 |
| 1.1 核糖体失活蛋白简介 | 第10-14页 |
| 1.1.1 核糖体失活蛋白生化特征 | 第10-11页 |
| 1.1.2 核糖体失活蛋白的抗肿瘤活性 | 第11-13页 |
| 1.1.3 RIPs作用细胞的机制 | 第13-14页 |
| 1.2 细胞凋亡的研究 | 第14-17页 |
| 1.2.1 细胞凋亡的定义及特征 | 第14-15页 |
| 1.2.2 TCS诱导细胞凋亡的分子机理 | 第15-16页 |
| 1.2.3 细胞凋亡的检测 | 第16-17页 |
| 1.3 抗肿瘤药物的现状 | 第17页 |
| 1.3.1 抗肿瘤药物的分类 | 第17页 |
| 1.3.2 抗肿瘤药物简介 | 第17页 |
| 1.4 穿膜肽在抗肿瘤药物中的应用 | 第17-19页 |
| 1.4.1 蛋白运输 | 第18页 |
| 1.4.2 寡聚核苷酸的运输 | 第18-19页 |
| 1.5 连接肽对融合蛋白活性的影响 | 第19-22页 |
| 1.5.1 天然多功能蛋白中的连接肽 | 第19-20页 |
| 1.5.2 柔性连接肽 | 第20-21页 |
| 1.5.3 刚性连接肽 | 第21-22页 |
| 1.6 课题研究意义、目的及内容 | 第22-23页 |
| 第2章 一般材料和方法 | 第23-30页 |
| 2.1 常用的试验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.2 常用试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 一般试剂 | 第23-24页 |
| 2.2 仪器与设备 | 第24-25页 |
| 2.3 主要试剂的配制 | 第25-27页 |
| 2.4 常用方法 | 第27-30页 |
| 2.4.1 细胞传代 | 第27页 |
| 2.4.2 细胞冻存 | 第27页 |
| 2.4.3 细胞复苏 | 第27-28页 |
| 2.4.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.4.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第28-30页 |
| 第3章 连接肽对融合蛋白功能的影响 | 第30-38页 |
| 3.1 前言 | 第30页 |
| 3.2 材料与方法 | 第30-33页 |
| 3.2.1 材料与主要试剂 | 第30页 |
| 3.2.2 常用方法 | 第30-33页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第33-36页 |
| 3.3.1 EGFP-linker2-ARF融合蛋白的构建、表达和纯化 | 第33页 |
| 3.3.2 EGFP-linker7-ARF融合蛋白的构建、表达与纯化 | 第33-36页 |
| 3.3.3 EGFP-linker7-ARF融合蛋白的穿膜活性比较 | 第36页 |
| 3.4 连接肽对融合蛋白功能影响小结 | 第36-38页 |
| 第4章 重组TCS的生物活性研究 | 第38-47页 |
| 4.1 引言 | 第38页 |
| 4.2 材料与方法 | 第38-41页 |
| 4.2.1 仪器与试剂 | 第38页 |
| 4.2.2 CTAB法抽提天花粉基因组DNA | 第38-39页 |
| 4.2.3 TCS重组表达质粒的构建 | 第39页 |
| 4.2.4 重组TCS蛋白表达纯化 | 第39页 |
| 4.2.5 重组TCS的生物活性 | 第39-40页 |
| 4.2.6 MTT方法检测TCS抑制肿瘤细胞增殖活性 | 第40页 |
| 4.2.7 细胞凋亡检测 | 第40-41页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第41-45页 |
| 4.3.1 天花粉基因组DNA抽提 | 第41-42页 |
| 4.3.2 TCS重组质粒构建 | 第42-43页 |
| 4.3.3 TCS表达与纯化 | 第43页 |
| 4.3.4 重组TCS的活性检测 | 第43-44页 |
| 4.3.5 MTT实验检测TCS对HeLa的细胞毒性 | 第44-45页 |
| 4.3.6 凋亡细胞DNAladder片段检测 | 第45页 |
| 4.4 本章实验总结 | 第45-47页 |
| 第5章 带有穿膜肽的TCS融合蛋白的生物活性研究 | 第47-62页 |
| 5.1 前言 | 第47页 |
| 5.2 材料与方法 | 第47-50页 |
| 5.2.1 主要仪器、试剂 | 第47-48页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第48-50页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第50-61页 |
| 5.3.1 pET28a-TCS-ARF重组质粒构建 | 第50-51页 |
| 5.3.2 pET28a-TCS-HBD重组质粒构建 | 第51-52页 |
| 5.3.3 pET28b-TCS-HBD表达质粒构建 | 第52页 |
| 5.3.4 TCS-ARF融合蛋白的表达纯化 | 第52-53页 |
| 5.3.5 TCS-HBD (pET28a)融合蛋白的表达与纯化 | 第53-54页 |
| 5.3.6 TCS-HBD (pET28b)蛋白表达纯化 | 第54-55页 |
| 5.3.7 重组蛋白活性检测 | 第55-56页 |
| 5.3.8 穿膜肽的引入对融合蛋白穿膜活性的影响 | 第56-57页 |
| 5.3.9 穿膜肽的引入对细胞毒性的影响 | 第57-59页 |
| 5.3.10 DNAladder电泳观察凋亡细胞核染色质断裂 | 第59页 |
| 5.3.11 DAPI染色观察凋亡细胞核形态 | 第59-60页 |
| 5.3.12 HBD-TCS融合蛋白对肺癌细胞A549的毒性 | 第60-61页 |
| 5.6 本章小结 | 第61-62页 |
| 结论与展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
