| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-31页 |
| 第一部分 植物启动子研究进展 | 第16-23页 |
| 1.1 真核生物基因上游调控序列结构及作用模式 | 第16-17页 |
| 1.2 植物启动子研究进展 | 第17-23页 |
| 1.2.1 植物启动子结构及特征 | 第17-18页 |
| 1.2.2 植物启动子分类及特点 | 第18-20页 |
| 1.2.3 启动子克隆常用技术 | 第20页 |
| 1.2.4 启动子的研究方法 | 第20-23页 |
| 第二部分抗草甘膦转基因作物研究进展 | 第23-31页 |
| 2.1 草甘膦性质与作用机理 | 第23-25页 |
| 2.1.1 草甘膦除草剂性质及发展 | 第23-24页 |
| 2.1.2 草甘膦作用机制 | 第24-25页 |
| 2.2 转基因抗草甘膦植物抗性机理 | 第25-27页 |
| 2.2.1 EPSP合酶研究进展 | 第25-26页 |
| 2.2.2 草甘膦代谢酶研究进展 | 第26-27页 |
| 2.3 外源基因在转基因植物中高效表达研究进展 | 第27-28页 |
| 2.3.1 启动子 | 第27页 |
| 2.3.2 基因改造 | 第27页 |
| 2.3.3 信号肽 | 第27-28页 |
| 2.3.4 多基因策略 | 第28页 |
| 2.4 抗草甘膦转基因植物研究进展 | 第28-29页 |
| 2.4.1 抗草甘膦转基因植物研究现状 | 第28页 |
| 2.4.2 抗草甘膦转基因棉花研究进展 | 第28-29页 |
| 2.5 立题依据及研究路线 | 第29-31页 |
| 第二章 棉花GhEF1A家族基因表达特性及GhEF1A8启动子的克隆与分析 | 第31-47页 |
| 2.1 材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 2.1.2 质粒与菌株 | 第31-32页 |
| 2.1.3 酶和生化试剂 | 第32页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第32页 |
| 2.1.5 培养基及常用溶液配制 | 第32页 |
| 2.2 方法 | 第32-40页 |
| 2.2.1 棉花总RNA提取（TRIZOL法） | 第32-33页 |
| 2.2.2 cDNA反转录 | 第33页 |
| 2.2.3 实时荧光定量RT-PCR | 第33-34页 |
| 2.2.4 改良CTAB法提取棉花基因组 | 第34-35页 |
| 2.2.5 TAIL-PCR反应体系及条件 | 第35-37页 |
| 2.2.6 质粒DNA的小量提取 | 第37-38页 |
| 2.2.7 PCR扩增和纯化 | 第38页 |
| 2.2.8 DNA酶切与连接 | 第38-39页 |
| 2.2.9 启动子序列测定及生物信息学分析 | 第39-40页 |
| 2.3 结果 | 第40-44页 |
| 2.3.1 棉花GhEF1A家族基因表达特性 | 第40页 |
| 2.3.2 棉花GhEF1A8基因启动子的克隆 | 第40页 |
| 2.3.3 棉花GhEF1A8基因启动子的序列分析 | 第40-44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-47页 |
| 第三章 棉花GhEF1A8基因启动子的结构分析与功能鉴定 | 第47-61页 |
| 3.1 材料 | 第48-49页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 3.1.2 质粒与菌株 | 第48页 |
| 3.1.3 酶和生化试剂 | 第48页 |
| 3.1.4 仪器设备 | 第48页 |
| 3.1.5 培养基及常用溶液配制 | 第48-49页 |
| 3.2 方法 | 第49-55页 |
| 3.2.1 启动子 5’缺失序列及 5’UTR缺失序列的扩增 | 第49-50页 |
| 3.2.2 启动子 5’缺失序列及 5’UTR缺失序列植物表达载体的构建 | 第50-51页 |
| 3.2.3 农杆菌电击转化感受态细胞的制备 | 第51页 |
| 3.2.4 植物表达载体转化农杆菌 | 第51-52页 |
| 3.2.5 烟草无菌苗的培养及叶盘法转化 | 第52页 |
| 3.2.6 Kana抗性植株筛选 | 第52页 |
| 3.2.7 移栽无菌苗 | 第52页 |
| 3.2.8 GUS组织化学染色 | 第52-53页 |
| 3.2.9 GUS蛋白活性分析 | 第53-55页 |
| 3.3 结果 | 第55-59页 |
| 3.3.1 GhEF1A8启动子全长及缺失突变植物表达载体的构建 | 第55页 |
| 3.3.2 转基因烟草的转化及分子鉴定 | 第55-56页 |
| 3.3.3 GhEF1A8启动子表达特性及 5’UTR对启动子活性的影响 | 第56-58页 |
| 3.3.4 GhEF1A8启动子上游基本调控元件的鉴定 | 第58-59页 |
| 3.4 讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 抗草甘膦基因gr79、gat的功能鉴定及抗草甘膦转基因棉花的培育 | 第61-80页 |
| 4.1 材料 | 第61-62页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第61页 |
| 4.1.2 质粒与菌株 | 第61页 |
| 4.1.3 酶和生化试剂 | 第61页 |
| 4.1.4 仪器设备 | 第61页 |
| 4.1.5 培养基及常用溶液配制 | 第61-62页 |
| 4.2 方法 | 第62-67页 |
| 4.2.1 gr79-epsps、gat基因改造 | 第62页 |
| 4.2.2 抗草甘膦基因植物表达载体的构建 | 第62页 |
| 4.2.3 农杆菌电击转化感受态细胞的制备 | 第62页 |
| 4.2.4 植物表达载体转化农杆菌 | 第62页 |
| 4.2.5 烟草无菌苗的培养及叶盘法转化 | 第62页 |
| 4.2.6 Kana抗性植株的筛选 | 第62-63页 |
| 4.2.7 无菌苗的移栽 | 第63页 |
| 4.2.8 Southern blot检测转基因烟草外源基因拷贝数 | 第63-65页 |
| 4.2.9 蛋白质的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第65-67页 |
| 4.2.10 Western blot分析 | 第67页 |
| 4.2.11 转基因烟草抗性检测 | 第67页 |
| 4.2.12 转基因棉花抗性检测 | 第67页 |
| 4.3 结果 | 第67-77页 |
| 4.3.1 抗草甘膦基因gr79、gat的基因改造 | 第67-68页 |
| 4.3.2 植物表达载体的构建 | 第68-69页 |
| 4.3.3 转基因烟草的转化及分子鉴定 | 第69页 |
| 4.3.4 转基因烟草抗性鉴定 | 第69-71页 |
| 4.3.5 转基因烟草的转化及分子鉴定 | 第71-73页 |
| 4.3.6 转基因烟草抗性鉴定 | 第73页 |
| 4.3.7 T0代转基因棉花筛选及初步分子鉴定 | 第73页 |
| 4.3.8 T1代转基因棉花的检测 | 第73-77页 |
| 4.4 讨论 | 第77-80页 |
| 第五章 全文结论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 作者简历 | 第89页 |
