| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-21页 |
| 1.1 卵母细胞冷冻保存的意义 | 第14页 |
| 1.2 卵母细胞冷冻保存的方法 | 第14-15页 |
| 1.2.1 慢速冷冻 | 第14-15页 |
| 1.2.2 玻璃化冷冻 | 第15页 |
| 1.3 玻璃化冷冻卵母细胞存在的问题 | 第15-16页 |
| 1.3.1 透明带硬化引起受精能力降低 | 第15-16页 |
| 1.3.2 Ca~(2+)浓度升高引起透明带硬化 | 第16页 |
| 1.4 玻璃化冷冻引起Ca~(2+)浓度升高的途径 | 第16-18页 |
| 1.4.1 胞外Ca~(2+)内流 | 第17页 |
| 1.4.2 胞内钙库Ca~(2+)的释放 | 第17-18页 |
| 1.5 Ca~(2+)调控物质简介 | 第18页 |
| 1.6 Ca~(2+)调控基因简介 | 第18-19页 |
| 1.7 研究展望 | 第19-20页 |
| 1.8 本研究的立题依据及研究内容 | 第20-21页 |
| 1.8.1 立题依据 | 第20页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 玻璃化冷冻对牛卵母细胞Ca~(2+)的影响 | 第21-31页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料 | 第21-24页 |
| 2.2.1 试验材料 | 第21页 |
| 2.2.2 主要试验试剂 | 第21-22页 |
| 2.2.3 主要仪器设备 | 第22页 |
| 2.2.4 主要溶液配制 | 第22-24页 |
| 2.3 试验方法 | 第24-25页 |
| 2.3.1 卵母细胞采集和体外成熟 | 第24页 |
| 2.3.2 试验设计 | 第24页 |
| 2.3.3 卵母细胞玻璃化冷冻及解冻 | 第24-25页 |
| 2.3.4 卵母细胞[Ca~(2+)]i、ER Ca~(2+)、mCa~(2+)水平检测 | 第25页 |
| 2.3.5 卵母细胞内质网染色 | 第25页 |
| 2.3.6 卵母细胞IP3R1染色 | 第25页 |
| 2.4 试验结果与分析 | 第25-29页 |
| 2.4.1 卵母细胞[Ca~(2+)]i检测 | 第26页 |
| 2.4.2 卵母细胞ER Ca~(2+)检测 | 第26-27页 |
| 2.4.3 卵母细胞mCa~(2+)检测 | 第27-28页 |
| 2.4.4 内质网分布检测 | 第28页 |
| 2.4.5 IP3R1分布检测 | 第28-29页 |
| 2.5 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 RR处理对玻璃化冷冻牛卵母细胞Ca~(2+)的影响 | 第31-40页 |
| 3.1 引言 | 第31页 |
| 3.2 材料 | 第31-33页 |
| 3.2.1 试验材料 | 第31页 |
| 3.2.2 主要试验试剂 | 第31-32页 |
| 3.2.3 主要试验仪器设备 | 第32页 |
| 3.2.4 主要溶液配制 | 第32-33页 |
| 3.3 试验方法 | 第33-34页 |
| 3.3.1 卵母细胞采集和体外成熟 | 第33页 |
| 3.3.2 RR处理 | 第33页 |
| 3.3.3 卵母细胞玻璃化冷冻及解冻 | 第33页 |
| 3.3.4 卵母细胞[Ca~(2+)]i、ER Ca~(2+)、mCa~(2+)水平检测 | 第33页 |
| 3.3.5 卵母细胞ATP含量检测 | 第33页 |
| 3.3.6 卵母细胞 ΔΨm检测 | 第33页 |
| 3.3.7 卵母细胞凋亡检测 | 第33-34页 |
| 3.3.8 孤雌激活与囊胚细胞计数 | 第34页 |
| 3.4 试验结果与分析 | 第34-39页 |
| 3.4.1 卵母细胞[Ca~(2+)]i、ER Ca~(2+)、mCa~(2+)水平检测 | 第34-35页 |
| 3.4.2 ATP含量检测 | 第35-36页 |
| 3.4.3 ΔΨm检测 | 第36-37页 |
| 3.4.4 凋亡检测 | 第37-38页 |
| 3.4.5 发育能力分析 | 第38-39页 |
| 3.5 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 BAPTA处理对玻璃化冷冻牛卵母细胞Ca~(2+)的影响 | 第40-50页 |
| 4.1 引言 | 第40页 |
| 4.2 材料 | 第40-41页 |
| 4.2.1 试验材料 | 第40页 |
| 4.2.2 主要试验试剂 | 第40页 |
| 4.2.3 主要试验仪器设备 | 第40-41页 |
| 4.2.4 主要溶液配制 | 第41页 |
| 4.3 试验方法 | 第41-43页 |
| 4.3.1 卵母细胞采集和体外成熟 | 第41页 |
| 4.3.2 BAPTA处理 | 第41页 |
| 4.3.3 卵母细胞玻璃化冷冻及解冻 | 第41-42页 |
| 4.3.4 卵母细胞[Ca~(2+)]i、ER Ca~(2+)、mCa~(2+)水平检测 | 第42页 |
| 4.3.5 卵母细胞CGs染色 | 第42页 |
| 4.3.6 卵母细胞体外受精 | 第42页 |
| 4.3.7 精子穿卵检测 | 第42页 |
| 4.3.8 发育能力检测 | 第42页 |
| 4.3.9 BAPTA+RR联合处理 | 第42页 |
| 4.3.10 囊胚细胞计数和qRT-PCR检测囊胚凋亡、植入基因的表达 | 第42-43页 |
| 4.4 试验结果与分析 | 第43-48页 |
| 4.4.1 卵母细胞[Ca~(2+)]i、ER Ca~(2+)、mCa~(2+)水平检测 | 第43-44页 |
| 4.4.2 CGs分布检测 | 第44-45页 |
| 4.4.3 精子穿卵检测 | 第45-46页 |
| 4.4.4 发育能力检测 | 第46-47页 |
| 4.4.5 联合处理卵母细胞发育能力和囊胚质量检测 | 第47-48页 |
| 4.5 讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 玻璃化冷冻对牛卵母细胞转录组的影响 | 第50-62页 |
| 5.1 引言 | 第50页 |
| 5.2 材料 | 第50-51页 |
| 5.2.1 试验材料 | 第50页 |
| 5.2.2 主要试验试剂 | 第50页 |
| 5.2.3 主要试验仪器设备 | 第50-51页 |
| 5.2.4 主要溶液配制 | 第51页 |
| 5.3 试验方法 | 第51-53页 |
| 5.3.1 卵母细胞采集和体外成熟 | 第51页 |
| 5.3.2 卵母细胞玻璃化冷冻及解冻 | 第51页 |
| 5.3.3 Smart-seq2程序 | 第51-52页 |
| 5.3.4 Gene Ontology（GO）功能、Pathway通路显著性富集分析 | 第52页 |
| 5.3.5 qRT-PCR、Western blotting检测冷冻组和对照组基因的差异表达 | 第52-53页 |
| 5.4 试验结果与分析 | 第53-60页 |
| 5.4.1 数据过滤与质量评估 | 第53页 |
| 5.4.2 数据比对统计 | 第53-54页 |
| 5.4.3 差异表达基因统计 | 第54-58页 |
| 5.4.4 Gene Ontology（GO）功能、Pathway通路显著性富集分析 | 第58-59页 |
| 5.4.5 qRT-PCR、Western blotting验证冷冻组和对照组中差异表达的基因 | 第59-60页 |
| 5.5 讨论 | 第60-62页 |
| 第六章 全文结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简历 | 第73页 |
