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钙调素与ERECTA相互作用的研究--拟南芥LFR原核重组蛋白的纯化和多克隆抗体的制备

摘要第3-4页
Abstract第4-5页
缩写表第10-11页
第一部分 植物类受体激酶ERECTA 基因家族的研究进展第11-20页
    1 ERECTA 基因家族的发现第11-12页
    2 ERECTA 基因家族及其蛋白结构特点第12-13页
    3 ERECTA 基因家族的时空表达第13-14页
    4 ERECTA 基因家族的生物学作用第14-19页
        4.1 ERECTA 基因家族中存在的显性负突变第14-15页
        4.2 ERECTA 基因家族通过促进细胞增殖调节拟南芥器官生长和花的发育第15页
        4.3 ERECTA 基因家族调控气孔的分布和分化第15-16页
        4.4 ERECTA 基因家族参与调控胚珠的发育第16-17页
        4.5 ERECTA基因家族与MPK3,MPK6共同调节了拟南芥花药早期发育第17页
        4.6 ERECTA 参与A51/A52 调节的叶近轴与远轴形态建成第17页
        4.7 ERECTA 与 BREVIPEDICELLUS(BP)共同调节拟南芥节间距和花柄的形态建成第17-18页
        4.8 ERECTA 通过与生长素相互作用调节拟南芥花絮的形态建成第18页
        4.9 ERECTA 在抵御微生物侵染中发挥重要作用第18-19页
    5 展望第19-20页
第二部分 钙调素与ERECTA 相互作用的研究第20-44页
    前言第20页
    1 材料与试剂第20-21页
    2 实验方法第21-27页
        2.1 质粒DNA 的小量提取第21页
        2.2 基因枪转化洋葱表皮细胞第21-22页
        2.3 从工程菌中提取纯化重组钙调素第22页
        2.4 钙调素抗体制备第22页
        2.5 免疫印记检测抗体特异性第22页
        2.6 免疫组织化学定位第22-23页
        2.7 ERECTA 基因片段的克隆第23页
        2.8 质粒酶切第23-24页
        2.9 酶切片段的回收第24页
        2.10 酵母转化第24页
        2.11 酵母杂交第24页
        2.12 X-gal 染色第24页
        2.13 ERECTA 胞外预测结合域诱导表达及纯化第24-25页
        2.14 BIAcore 传感芯片标记及SPR 实时结合分析第25页
        2.15 拟南芥的种植第25页
        2.16 RNA 的提取第25页
        2.17 RT-PCR 半定量检测基因转录本的表达第25-26页
        2.18 拟南芥杂交及后代筛选鉴定第26页
        2.19 PCR 鉴定突变体用DNA 小量提取第26页
        2.20 拟南芥的转化及筛选第26-27页
    3 结果与分析第27-34页
        3.1 瞬时表达体系中ERECTA 的亚细胞定位第27-28页
        3.2 重组ACaM2 的提取纯化及抗血清制备第28页
        3.3 ACaM2 抗血清特异性检测第28-29页
        3.4 免疫组织化学分析第29-30页
        3.5 ERECTA 基因片段的克隆和酵母共转化第30页
        3.6 酵母泛素系统验证ERECTA 与CaM 相互作用第30-31页
        3.7 ERECTA胞外CaM预测结合域的表达纯化及其与CaM相互作用的SPR 分析第31-32页
        3.8 胞外钙调素超表达株系的筛选鉴定与表型观察第32-33页
        3.9 胞外钙调素超表达株系与er 突变体杂交后代纯合体筛选鉴定.第33-34页
        3.10 cam2与er 双重突变体的筛选鉴定与表型观察第34页
    4 讨论第34-36页
    参考文献第36-44页
第三部分 拟南芥LFR 原核重组蛋白纯化和多克隆抗体制备第44-53页
    前言第44页
    1 材料与方法第44-46页
        1.1 材料第44-45页
        1.2 方法第45-46页
    2 结果第46-50页
        2.1 重组GST:LFR 融合蛋白表达载体的构建与鉴定第46-47页
        2.2 重组GST:LFR 融合蛋白在大肠杆菌中的表达第47页
        2.3 GST:LFR 重组蛋白的分离纯化第47-48页
        2.4 抗血清的纯化及特异性检测第48-49页
        2.5 抗血清可识别拟南芥内源LFR 蛋白第49-50页
    3 讨论第50-52页
    参考文献第52-53页
结论第53-54页
附录第54-60页
    1 相关引物序列第54-55页
    2 ERECTA-YFP 融合基因表达载体构建(我室王志娟完成)第55页
    3 ERECTA 胞外CaM 预测结合域表达载体构建(我室王志娟完成)第55-57页
    4 重组GST:LFR 融合蛋白表达载体测序第57-59页
    5 间接ELISA 检测钙调素抗体效价第59-60页
致谢第60-61页
个人简历第61页

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