摘要 | 第3-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
缩写表 | 第10-11页 |
第一部分 植物类受体激酶ERECTA 基因家族的研究进展 | 第11-20页 |
1 ERECTA 基因家族的发现 | 第11-12页 |
2 ERECTA 基因家族及其蛋白结构特点 | 第12-13页 |
3 ERECTA 基因家族的时空表达 | 第13-14页 |
4 ERECTA 基因家族的生物学作用 | 第14-19页 |
4.1 ERECTA 基因家族中存在的显性负突变 | 第14-15页 |
4.2 ERECTA 基因家族通过促进细胞增殖调节拟南芥器官生长和花的发育 | 第15页 |
4.3 ERECTA 基因家族调控气孔的分布和分化 | 第15-16页 |
4.4 ERECTA 基因家族参与调控胚珠的发育 | 第16-17页 |
4.5 ERECTA基因家族与MPK3,MPK6共同调节了拟南芥花药早期发育 | 第17页 |
4.6 ERECTA 参与A51/A52 调节的叶近轴与远轴形态建成 | 第17页 |
4.7 ERECTA 与 BREVIPEDICELLUS(BP)共同调节拟南芥节间距和花柄的形态建成 | 第17-18页 |
4.8 ERECTA 通过与生长素相互作用调节拟南芥花絮的形态建成 | 第18页 |
4.9 ERECTA 在抵御微生物侵染中发挥重要作用 | 第18-19页 |
5 展望 | 第19-20页 |
第二部分 钙调素与ERECTA 相互作用的研究 | 第20-44页 |
前言 | 第20页 |
1 材料与试剂 | 第20-21页 |
2 实验方法 | 第21-27页 |
2.1 质粒DNA 的小量提取 | 第21页 |
2.2 基因枪转化洋葱表皮细胞 | 第21-22页 |
2.3 从工程菌中提取纯化重组钙调素 | 第22页 |
2.4 钙调素抗体制备 | 第22页 |
2.5 免疫印记检测抗体特异性 | 第22页 |
2.6 免疫组织化学定位 | 第22-23页 |
2.7 ERECTA 基因片段的克隆 | 第23页 |
2.8 质粒酶切 | 第23-24页 |
2.9 酶切片段的回收 | 第24页 |
2.10 酵母转化 | 第24页 |
2.11 酵母杂交 | 第24页 |
2.12 X-gal 染色 | 第24页 |
2.13 ERECTA 胞外预测结合域诱导表达及纯化 | 第24-25页 |
2.14 BIAcore 传感芯片标记及SPR 实时结合分析 | 第25页 |
2.15 拟南芥的种植 | 第25页 |
2.16 RNA 的提取 | 第25页 |
2.17 RT-PCR 半定量检测基因转录本的表达 | 第25-26页 |
2.18 拟南芥杂交及后代筛选鉴定 | 第26页 |
2.19 PCR 鉴定突变体用DNA 小量提取 | 第26页 |
2.20 拟南芥的转化及筛选 | 第26-27页 |
3 结果与分析 | 第27-34页 |
3.1 瞬时表达体系中ERECTA 的亚细胞定位 | 第27-28页 |
3.2 重组ACaM2 的提取纯化及抗血清制备 | 第28页 |
3.3 ACaM2 抗血清特异性检测 | 第28-29页 |
3.4 免疫组织化学分析 | 第29-30页 |
3.5 ERECTA 基因片段的克隆和酵母共转化 | 第30页 |
3.6 酵母泛素系统验证ERECTA 与CaM 相互作用 | 第30-31页 |
3.7 ERECTA胞外CaM预测结合域的表达纯化及其与CaM相互作用的SPR 分析 | 第31-32页 |
3.8 胞外钙调素超表达株系的筛选鉴定与表型观察 | 第32-33页 |
3.9 胞外钙调素超表达株系与er 突变体杂交后代纯合体筛选鉴定. | 第33-34页 |
3.10 cam2与er 双重突变体的筛选鉴定与表型观察 | 第34页 |
4 讨论 | 第34-36页 |
参考文献 | 第36-44页 |
第三部分 拟南芥LFR 原核重组蛋白纯化和多克隆抗体制备 | 第44-53页 |
前言 | 第44页 |
1 材料与方法 | 第44-46页 |
1.1 材料 | 第44-45页 |
1.2 方法 | 第45-46页 |
2 结果 | 第46-50页 |
2.1 重组GST:LFR 融合蛋白表达载体的构建与鉴定 | 第46-47页 |
2.2 重组GST:LFR 融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第47页 |
2.3 GST:LFR 重组蛋白的分离纯化 | 第47-48页 |
2.4 抗血清的纯化及特异性检测 | 第48-49页 |
2.5 抗血清可识别拟南芥内源LFR 蛋白 | 第49-50页 |
3 讨论 | 第50-52页 |
参考文献 | 第52-53页 |
结论 | 第53-54页 |
附录 | 第54-60页 |
1 相关引物序列 | 第54-55页 |
2 ERECTA-YFP 融合基因表达载体构建(我室王志娟完成) | 第55页 |
3 ERECTA 胞外CaM 预测结合域表达载体构建(我室王志娟完成) | 第55-57页 |
4 重组GST:LFR 融合蛋白表达载体测序 | 第57-59页 |
5 间接ELISA 检测钙调素抗体效价 | 第59-60页 |
致谢 | 第60-61页 |
个人简历 | 第61页 |