| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第13-31页 |
| 1.1 乳酸菌和益生素 | 第13-14页 |
| 1.1.1 乳酸菌 | 第13页 |
| 1.1.2 益生素 | 第13-14页 |
| 1.2 乳酸菌的应用 | 第14-18页 |
| 1.2.1 乳酸菌发酵食品 | 第14-15页 |
| 1.2.2 乳酸菌在医药中的应用 | 第15-17页 |
| 1.2.3 乳酸菌在饲料中的应用 | 第17-18页 |
| 1.2.4 乳酸菌在工业乳酸生产中的应用 | 第18页 |
| 1.3 乳酸菌的检测 | 第18-22页 |
| 1.3.1 检测乳酸菌的传统方法 | 第18-20页 |
| 1.3.2 乳酸菌的分子检测技术 | 第20-22页 |
| 1.4 复杂样品中微生物总DNA的提取 | 第22-23页 |
| 1.5 变性梯度凝胶电泳简介 | 第23-28页 |
| 1.5.1 变性梯度凝胶电泳原理 | 第24-26页 |
| 1.5.2 DGGE技术流程 | 第26-27页 |
| 1.5.3 DGGE技术在乳酸菌检测中的应用 | 第27-28页 |
| 1.5.4 DGGE技术存在的缺陷及对策 | 第28页 |
| 1.6 本论文的研究目的、意义和内容 | 第28-31页 |
| 1.6.1 研究目的和意义 | 第28-29页 |
| 1.6.2 主要研究内容 | 第29-31页 |
| 第二章 变性梯度凝胶电泳条件的摸索和优化 | 第31-44页 |
| 2.1 材料和方法 | 第32-37页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第32页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第32页 |
| 2.1.3 DGGE试剂准备 | 第32-34页 |
| 2.1.4 乳酸菌染色体DNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.1.5 PCR反应产物的变性梯度凝胶电泳(DGGE)检测 | 第35-37页 |
| 2.1.6 DGGE标准模型的建立 | 第37页 |
| 2.2 结果及讨论 | 第37-42页 |
| 2.2.1 实验菌株PCR产物的DGGE垂直胶分离 | 第37-39页 |
| 2.2.2 PCR产物的变性梯度凝胶电泳(DGGE)水平胶分离 | 第39页 |
| 2.2.3 通用引物对不同细菌16S rRNA基因扩增效率的差异 | 第39-41页 |
| 2.2.4 DGGE标准模型的建立 | 第41-42页 |
| 2.3 小结 | 第42-44页 |
| 第三章 自然环境中乳酸菌总DNA的提取及提取效果评价 | 第44-55页 |
| 3.1 材料和方法 | 第44-48页 |
| 3.1.1 材料 | 第44-45页 |
| 3.1.2 实验菌株 | 第45页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第45页 |
| 3.1.4 青贮秸秆饲料总DNA的提取 | 第45-46页 |
| 3.1.5 青贮饲料总DNA 16S rRNA基因的PCR扩增 | 第46页 |
| 3.1.6 青贮饲料中乳酸菌组成的PCR-DGGE分析 | 第46页 |
| 3.1.7 DNA提取效果的DGGE法评价 | 第46-47页 |
| 3.1.8 目标菌株的DNA提取灵敏度 | 第47-48页 |
| 3.2 结果和分析 | 第48-53页 |
| 3.2.1 青贮饲料总DNA的提取 | 第48-49页 |
| 3.2.2 青贮饲料16S rRNA基因扩增 | 第49-50页 |
| 3.2.3 青贮饲料中乳酸菌组成的PCR-DGGE分析 | 第50页 |
| 3.2.4 DNA提取效率的DGGE检测 | 第50-52页 |
| 3.2.5 目标菌株DNA的提取灵敏度 | 第52-53页 |
| 3.3 小结 | 第53-55页 |
| 第四章 PCR-DGGE技术对益生菌剂EM菌群的分析 | 第55-64页 |
| 4.1 材料和方法 | 第55-58页 |
| 4.1.1 样品 | 第55页 |
| 4.1.2 样品中细菌的平板分离、计数及理化性质 | 第55-56页 |
| 4.1.3 草酸铵结晶紫染色及显微观察 | 第56页 |
| 4.1.4 PCR-DGGE技术对筛选的细菌进行鉴定 | 第56页 |
| 4.1.5 DGGE法分析益生菌剂中的乳酸菌 | 第56-57页 |
| 4.1.6 变性梯度凝胶上有关条带的回收及其序列分析 | 第57-58页 |
| 4.2 结果和讨论 | 第58-63页 |
| 4.2.1 益生菌剂中细菌的平板分离、计数及理化性质 | 第58页 |
| 4.2.2 样品中细菌的染色及显微观察 | 第58-59页 |
| 4.2.3 DGGE技术对筛选的6株细菌的鉴定 | 第59-60页 |
| 4.2.4 益生菌剂及其转接培养物中乳酸菌组成的DGGE分析 | 第60-63页 |
| 4.3 小结 | 第63-64页 |
| 第五章 乳制品中的乳酸菌分析 | 第64-73页 |
| 5.1 材料和方法 | 第64-67页 |
| 5.1.1 样品 | 第64页 |
| 5.1.2 酸奶中细菌的平板分离、计数及理化性质 | 第64-65页 |
| 5.1.3 草酸铵结晶紫染色及显微观察 | 第65页 |
| 5.1.4 酸奶中分离菌株的DGGE鉴定 | 第65页 |
| 5.1.5 DGGE法分析样品中的乳酸菌 | 第65-66页 |
| 5.1.6 变性梯度凝胶上有关条带的回收及其序列分析 | 第66-67页 |
| 5.2 结果和讨论 | 第67-72页 |
| 5.2.1 酸奶中乳酸菌的平板分离和纯化及乳酸菌数量 | 第67-69页 |
| 5.2.2 分离菌株的DGGE鉴定 | 第69-70页 |
| 5.2.3 变性梯度凝胶电泳分析酸奶样品中的乳酸菌组成 | 第70-71页 |
| 5.2.4 部分菌群的16S rDNA片段测序结果及入库比对 | 第71-72页 |
| 5.3 小结 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
