| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-23页 |
| 1.1 原核生物染色体 DNA 复制 | 第8-12页 |
| 1.1.1 原核生物基因组的结构特点 | 第8-9页 |
| 1.1.2 原核生物染色体 DNA 的复制机制 | 第9-12页 |
| 1.2 原核生物染色体 DNA 复制起始区及复制起始蛋白 | 第12-15页 |
| 1.2.1 DNA 的复制起始区 | 第12-13页 |
| 1.2.2 DNA 复制起始蛋白 | 第13-15页 |
| 1.3 原核生物染色体复制起始区预测及验证 | 第15-20页 |
| 1.3.1 复制起始区的预测 | 第15-17页 |
| 1.3.2 复制起始区的验证方法 | 第17-20页 |
| 1.4 本研究的具体内容及研究路线 | 第20-23页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第21-22页 |
| 1.4.2 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 克隆及表达载体的构建 | 第23-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 载体及菌株 | 第23-24页 |
| 2.1.2 实验主要试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.3 实验器材 | 第25页 |
| 2.1.4 培养基、溶液的配制及其灭菌方法 | 第25-26页 |
| 2.2 载体构建方法 | 第26-34页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第26-27页 |
| 2.2.2 目的基因的获取 | 第27-29页 |
| 2.2.3 提取质粒 pGEX-4T-1 与 pET28a 并电泳鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.4 目的基因及质粒的双酶切 | 第30-32页 |
| 2.2.5 目的基因与载体的连接、转化及培养 | 第32-33页 |
| 2.2.6 阳性重组子的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3 实验结果 | 第34-40页 |
| 2.3.1 PCR 扩增目的基因及质粒载体的提取 | 第34-36页 |
| 2.3.2 目的片段及质粒载体的双酶切 | 第36-37页 |
| 2.3.3 阳性重组子的鉴定 | 第37-40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 第三章 复制起始蛋白 GST-DnaA 与 DnaA(IV)的表达与纯化 | 第41-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-43页 |
| 3.1.1 菌株 | 第41页 |
| 3.1.2 实验主要试剂 | 第41页 |
| 3.1.3 实验器材 | 第41页 |
| 3.1.4 培养基、溶液的配制及其灭菌方法 | 第41-43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-48页 |
| 3.2.1 基因工程菌的生长曲线及 GST-DnaA 与 DnaA(IV)蛋白的性质 | 第43-44页 |
| 3.2.2 GST-DnaA 与 DnaA(IV)蛋白诱导条件的确定 | 第44-45页 |
| 3.2.3 GST-DnaA 与 DnaA(IV)蛋白的表达纯化 | 第45-48页 |
| 3.3 实验结果 | 第48-54页 |
| 3.3.1 基因工程菌的生长曲线及 GST-DnaA 与 DnaA(IV)蛋白的性质 | 第48-50页 |
| 3.3.2 GST-DnaA 与 DnaA(IV)蛋白诱导条件的确定 | 第50-51页 |
| 3.3.3 GST-DnaA 与 DnaA(IV)蛋白的纯化 | 第51-54页 |
| 3.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第四章 复制起始蛋白与复制起始区结合性实验 | 第55-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.1.1 DnaA(IV)蛋白 | 第55页 |
| 4.1.2 实验主要试剂 | 第55页 |
| 4.1.3 实验器材 | 第55页 |
| 4.1.4 培养基、溶液的配制及其灭菌方法 | 第55-56页 |
| 4.2 实验方法 | 第56-59页 |
| 4.2.1 ori C 区的扩增 | 第56-57页 |
| 4.2.2 引物设计及退火 | 第57-58页 |
| 4.2.3 EMSA 验证 ori C 与 DnaA(IV)的结合 | 第58-59页 |
| 4.3 实验结果 | 第59-64页 |
| 4.3.1 线状及环状染色体 ori C 的扩增 | 第59-60页 |
| 4.3.2 EMSA 验证 ori C 与 DnaA(IV)蛋白的结合 | 第60-64页 |
| 4.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 第五章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 5.1 结论 | 第65-66页 |
| 5.2 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 发表论文和参加科研情况 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
