| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-21页 |
| 1.1 合成生物系统的组合优化方法 | 第8-17页 |
| 1.1.1 单个元件的微调 | 第9-11页 |
| 1.1.2 代谢通路的系统优化 | 第11-14页 |
| 1.1.3 基因组范围内靶点的识别和组合修饰 | 第14-16页 |
| 1.1.4 合成生物系统的组合优化方法小结与展望 | 第16-17页 |
| 1.2 合成生物学的有力工具-Red 重组工程的介绍与发展 | 第17-18页 |
| 1.2.1 Red 重组系统的结构 | 第17-18页 |
| 1.3 本文选题背景与主要内容 | 第18-21页 |
| 1.3.1 选题背景 | 第18-19页 |
| 1.3.2 主要内容 | 第19-21页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第21-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-28页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.2 引物设计 | 第22-24页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.1.4 实验药品 | 第25-26页 |
| 2.1.5 主要溶液 | 第26-27页 |
| 2.1.6 培养基 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第28-29页 |
| 2.2.2 提取细菌中质粒的方法 | 第29-30页 |
| 2.2.3 DNA 片段的回收纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.4 目标分子的 PCR 扩增反应 | 第31-32页 |
| 2.2.5 酶切体系 | 第32-33页 |
| 2.2.6 酶连体系 | 第33-34页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第34-36页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第36-60页 |
| 3.1 关键质粒的构建 | 第36-44页 |
| 3.1.1 pLX07 质粒 | 第36-38页 |
| 3.1.2 pLX13 系列质粒 | 第38-41页 |
| 3.1.3 pLX15 质粒 | 第41-42页 |
| 3.1.4 pLX23 质粒 | 第42-44页 |
| 3.2 MIPE 参数的优化设计 | 第44-50页 |
| 3.2.1 共转化策略能明显提高 MIPE 重组效率 | 第44-45页 |
| 3.2.2 用 pLX13 系列质粒深入研究不同参数下 MIPE 重组效率的变化 | 第45-48页 |
| 3.2.3 优化重组引物 ssDNA 与质粒浓度 | 第48-50页 |
| 3.3 共筛选策略全面提升 MIPE 系统 | 第50-56页 |
| 3.3.1 基因组共筛选 | 第50-51页 |
| 3.3.2 质粒共筛选 | 第51-53页 |
| 3.3.3 基于限制性内切酶的共筛选系统 | 第53-54页 |
| 3.3.4 调节普通 Oligo 与 CoS-Oligo 比例来优化 MIPE 系统 | 第54-56页 |
| 3.4 MIPE 技术应用举例 | 第56-60页 |
| 3.4.1 用 MIPE 技术提高大肠杆菌产核黄素产量 | 第56-57页 |
| 3.4.2 用 MIPE 技术来突变红色荧光蛋白基因 | 第57-60页 |
| 第四章 结论与展望 | 第60-62页 |
| 4.1 结论 | 第60-61页 |
| 4.2 展望 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
