| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 符号说明 | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-27页 |
| 1.1 乙偶姻的简介 | 第13-15页 |
| 1.1.1 乙偶姻的性质 | 第13页 |
| 1.1.2 乙偶姻的用途 | 第13-14页 |
| 1.1.3 乙偶姻的生理学作用 | 第14页 |
| 1.1.4 乙偶姻的生产 | 第14-15页 |
| 1.2 乙偶姻的合成代谢途径 | 第15-16页 |
| 1.3 乙偶姻分解代谢的研究 | 第16-20页 |
| 1.3.1 AoDH ES | 第17-19页 |
| 1.3.2 乙偶姻代谢的调控因子 | 第19-20页 |
| 1.3.3 乙偶姻分解代谢途径的调控 | 第20页 |
| 1.4 σ~(54) | 第20-22页 |
| 1.5 L-乳酸脱氢酶 | 第22-24页 |
| 1.5.1 NAD依赖的L-乳酸脱氢酶L-nLDH | 第22-23页 |
| 1.5.2 NAD非依赖的L-乳酸脱氢酶L-iLDH | 第23页 |
| 1.5.3 Pseudomonas stutzeri A1501中的新型L-iLDH | 第23-24页 |
| 1.6 本论文的研究意义及研究内容 | 第24-27页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第24-26页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 Pseudomonas putida KT2440中乙偶姻代谢基因簇研究 | 第27-55页 |
| 2.1 材料与方法 | 第27-32页 |
| 2.1.1 主要仪器和试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第28-29页 |
| 2.1.3 引物 | 第29-31页 |
| 2.1.4 培养基与缓冲液 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-40页 |
| 2.2.1 基因敲除 | 第32-36页 |
| 2.2.2 蛋白纯化 | 第36-39页 |
| 2.2.3 转录及共转录分析 | 第39-40页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第40-54页 |
| 2.3.1 敲除菌株的验证 | 第40-42页 |
| 2.3.2 表达菌株的构建 | 第42-43页 |
| 2.3.3 蛋白纯化 | 第43页 |
| 2.3.4 酶活测定 | 第43-45页 |
| 2.3.5 AcoAB动力学常数测定 | 第45-46页 |
| 2.3.6 AcoAB催化AC产物为乙醛的鉴定 | 第46-47页 |
| 2.3.7 AcoAB催化AC构型的鉴定 | 第47-52页 |
| 2.3.8 转录分析 | 第52-53页 |
| 2.3.9 共转录分析 | 第53-54页 |
| 2.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 第三章 Pseudomonas putida KT2440中乙偶姻代谢调控机制研究 | 第55-77页 |
| 3.1 材料与方法 | 第55-58页 |
| 3.1.1 主要仪器和试剂 | 第55页 |
| 3.1.2 菌株和质粒 | 第55-56页 |
| 3.1.3 引物 | 第56-58页 |
| 3.1.4 培养基与缓冲液 | 第58页 |
| 3.2 实验方法 | 第58-63页 |
| 3.2.1 基因敲除 | 第58页 |
| 3.2.2 基因回补 | 第58-59页 |
| 3.2.3 aco操纵子及调控基因转录起始位点的确定 | 第59-62页 |
| 3.2.4 启动子活性分析 | 第62-63页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第63-75页 |
| 3.3.1 基因rpoN的敲除 | 第63-64页 |
| 3.3.2 基因acoR及rpoN的回补 | 第64-65页 |
| 3.3.3 敲除菌株及回补菌株生理验证 | 第65页 |
| 3.3.4 5'RACE确定转录起始位点 | 第65-67页 |
| 3.3.5 菌株P.putida KT2440△qedH818△qedH823△acoC及P.putidaKT2440△bdh△qedH818△qedH823△acoC的构建 | 第67-68页 |
| 3.3.6 融合质粒的构建 | 第68-70页 |
| 3.3.7 AcoR的调控机制 | 第70-72页 |
| 3.3.8 AcoR的效应分子 | 第72-75页 |
| 3.4 本章小结 | 第75-77页 |
| 第四章 Pseudomonas stutzeri A11501中新型L-iLDH的研究 | 第77-101页 |
| 4.1 材料与方法 | 第77-81页 |
| 4.1.1 主要仪器和试剂 | 第77页 |
| 4.1.2 菌株和质粒 | 第77-79页 |
| 4.1.3 引物 | 第79-80页 |
| 4.1.4 培养基与缓冲液 | 第80-81页 |
| 4.2 实验方法 | 第81-88页 |
| 4.2.1 基因敲除 | 第81-82页 |
| 4.2.2 基因回补 | 第82-83页 |
| 4.2.3 定点突变 | 第83-87页 |
| 4.2.4 P.stutzeri A1501中L-iLDH三个亚基的纯化 | 第87-88页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第88-99页 |
| 4.3.1 敲除及回补菌株的验证 | 第88-90页 |
| 4.3.2 定点突变表达质粒的构建 | 第90-91页 |
| 4.3.3 定点突变表达菌株的酶活测定 | 第91-92页 |
| 4.3.4 P.stutzeri A1501中L-iLDH的三个亚基的表达纯化 | 第92-99页 |
| 4.4 本章小结 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-111页 |
| 致谢 | 第111-113页 |
| 硕士期间论文发表情况 | 第113页 |
