| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 Ras原癌基因族的研究进展 | 第13-20页 |
| 引言 | 第13页 |
| 1 ras基因的发现 | 第13-14页 |
| 2 Ras原癌基因家族 | 第14-15页 |
| 3 Ras蛋白的活化 | 第15-16页 |
| 4 R-Ras亚家族的研究进展 | 第16-19页 |
| ·R-Ras的研究进展 | 第16-17页 |
| ·TC21/R-Ras2的研究进展 | 第17-18页 |
| ·M-Ras/R-Ras3的研究进展 | 第18-19页 |
| 5 展望 | 第19-20页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第20-22页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第20页 |
| 2 研究内容 | 第20-21页 |
| 3 实验流程 | 第21-22页 |
| ·BmBras2蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备 | 第21页 |
| ·BmBras2蛋白的表达情况以及功能分析 | 第21-22页 |
| 第三章 BmBras2基因的生物信息学分析 | 第22-31页 |
| 1 工具和软件 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-23页 |
| 3 结果 | 第23-29页 |
| ·BmBras2基因的序列信息 | 第23-24页 |
| ·氨基酸序列的同源性分析 | 第24-26页 |
| ·进化树 | 第26页 |
| ·疏水性分析 | 第26-27页 |
| ·跨膜区分析 | 第27-28页 |
| ·信号肽预测 | 第28页 |
| ·BmBras2蛋白在细胞内定位的预测 | 第28-29页 |
| ·功能位点的分析 | 第29页 |
| 4 讨论 | 第29-31页 |
| 第四章 BmBras2基因的克隆、原核表达和纯化 | 第31-47页 |
| 1 材料与试剂 | 第31-34页 |
| ·材料与设备 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31页 |
| ·主要试剂的配制 | 第31-34页 |
| 2 方法 | 第34-41页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第34-35页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第35-36页 |
| ·质粒的小量制备 | 第36页 |
| ·目的片段与表达载体pET-28a(+)的双酶切及回收 | 第36-37页 |
| ·连接反应 | 第37页 |
| ·E.coli TG1、Rosetta (DE3)感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第37-38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38页 |
| ·重组pET-28a(+)-BmBras2质粒的筛选与鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的转化及鉴定 | 第39页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中表达 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE电泳分析 | 第40页 |
| ·包涵体的溶解与复性 | 第40-41页 |
| ·镍柱亲和层析 | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-45页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第41-42页 |
| ·重组质粒的PCR扩增和双酶切鉴定 | 第42页 |
| ·序列测定 | 第42页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第42-44页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第44页 |
| ·融合蛋白的质谱分析 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 多克隆抗体的制备及效价测定 | 第47-56页 |
| 1 材料与试剂 | 第47-49页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·试剂的配制 | 第47-49页 |
| 2 方法 | 第49-52页 |
| ·Bradford检测蛋白浓度 | 第49页 |
| ·抗体制备 | 第49-51页 |
| ·Western blot检测抗体特异性 | 第51-52页 |
| 3 结果 | 第52-54页 |
| ·抗体的纯化 | 第52-53页 |
| ·抗体的效价测定 | 第53页 |
| ·Western blot检测抗体特异性 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 第六章 BmBras2蛋白的表达分析 | 第56-66页 |
| 1 材料与试剂 | 第56-57页 |
| ·材料与仪器 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·试剂的配制 | 第56-57页 |
| 2 方法 | 第57-60页 |
| ·总蛋白质的提取及定量 | 第57页 |
| ·Western blot检测BmBras2蛋白的时期分布 | 第57页 |
| ·Western blot检测BmBras2蛋白的组织分布 | 第57页 |
| ·荧光定量PCR的引物设计 | 第57-58页 |
| ·总RNA的提取及定量 | 第58页 |
| ·反转录反应 | 第58-59页 |
| ·荧光定量PCR | 第59页 |
| ·荧光定量PCR数据处理方法 | 第59-60页 |
| 3 结果 | 第60-64页 |
| ·BmBras2蛋白在家蚕各发育时期的表达情况 | 第60页 |
| ·BmBras2蛋白在五龄幼虫各组织的表达情况 | 第60-61页 |
| ·家蚕不同发育时期BmBras2基因转录水平的变化 | 第61-62页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织中BmBras2基因转录水平的变化 | 第62-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 第七章 亚细胞定位 | 第66-69页 |
| 1 材料与试剂 | 第66-67页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·试剂 | 第66页 |
| ·试剂配制 | 第66-67页 |
| 2 方法 | 第67页 |
| 3 结果 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 第八章 BmBras2蛋白的功能研究 | 第69-73页 |
| 1 试剂和材料 | 第69页 |
| ·材料与设备 | 第69页 |
| ·试剂 | 第69页 |
| 2 方法 | 第69-70页 |
| ·细胞计数及铺板 | 第69页 |
| ·rBmBras2蛋白的添加 | 第69-70页 |
| ·CCK-8法检测细胞增殖 | 第70页 |
| 3 结果 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
