| 英文缩略词表 | 第8-10页 |
| 中文摘要 | 第10-15页 |
| 英文摘要 | 第15-20页 |
| 1 前言 | 第21-25页 |
| 2 实验材料 | 第25-30页 |
| 2.1 实验细胞系 | 第25页 |
| 2.2 实验动物 | 第25-26页 |
| 2.3 实验试剂和耗材 | 第26-29页 |
| 2.4 实验仪器和设备 | 第29-30页 |
| 2.5 常用液体配制方案 | 第30页 |
| 3 实验方法 | 第30-50页 |
| 3.1 细胞培养 | 第30-32页 |
| 3.1.1 细胞复苏 | 第30页 |
| 3.1.2 细胞培养 | 第30-31页 |
| 3.1.3 细胞传代 | 第31-32页 |
| 3.1.4 细胞计数 | 第32页 |
| 3.1.5 细胞冻存 | 第32页 |
| 3.2 BPV(phen)药物配制 | 第32页 |
| 3.3 MTT法细胞活性检测 | 第32-33页 |
| 3.4 Western blotting实验 | 第33-39页 |
| 3.4.1 用液配制 | 第33-36页 |
| 3.4.2 细胞总蛋白提取 | 第36页 |
| 3.4.3 蛋白浓度测定及上样蛋白制备 | 第36-37页 |
| 3.4.4 制备聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE） | 第37页 |
| 3.4.5 聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳 | 第37页 |
| 3.4.6 转膜（湿转） | 第37-38页 |
| 3.4.7 封闭 | 第38页 |
| 3.4.8 抗体孵育 | 第38页 |
| 3.4.9 显影 | 第38-39页 |
| 3.5 流式细胞仪检测凋亡 | 第39页 |
| 3.6 乳酸脱氢酶（LDH）活性检测 | 第39-41页 |
| 3.7 动物实验 | 第41-42页 |
| 3.7.1 BPV(phen)动物分组处理 | 第41页 |
| 3.7.2 小鼠肝脏组织蛋白提取 | 第41页 |
| 3.7.3 Western Blotting检测自噬相关蛋白 | 第41-42页 |
| 3.8 BPV(phen)对MEF、HeLa、HepG2细胞自噬的影响 | 第42页 |
| 3.9 RFP-LC3 HeLa细胞免疫荧光实验 | 第42-43页 |
| 3.10 BPV(phen)对P62蛋白的影响 | 第43页 |
| 3.10.1 Western Blotting实验 | 第43页 |
| 3.10.2 免疫荧光实验 | 第43页 |
| 3.11 BPV(phen)对P62蛋白稳定性的影响及其影响方式 | 第43-44页 |
| 3.11.1 BPV(phen)对P62蛋白稳定性的影响 | 第43-44页 |
| 3.11.2 自噬抑制剂和/或蛋白酶体抑制剂对BPV(phen)降低P62稳定性的影响 | 第44页 |
| 3.12 自噬抑制剂和/或蛋白酶体抑制剂对BPV(phen)对P62定位于自噬体的影响 | 第44-45页 |
| 3.13 细胞过表达P62和His-Ubiquitin实验 | 第45页 |
| 3.14 免疫共沉淀实验检测BPV(phen)在抑制蛋白质合成条件下对P62泛素化的影响 | 第45-46页 |
| 3.15 P62 SiRNA基因沉默实验 | 第46-47页 |
| 3.16 P62质粒过表达实验 | 第47页 |
| 3.17 免疫荧光实验检测P62基因沉默对α-Tubulin和AC-tubulin的影响 | 第47-48页 |
| 3.18 Western Blotting检测BPV(phen)对HDAC6,α-Tubulin和AC-Tubulin的影响 | 第48页 |
| 3.19 免疫共沉淀实验检测BPV(phen)对P62和HDAC6结合力的影响 | 第48-49页 |
| 3.20 免疫荧光实验检测BPV(phen)对α-Tubulin和AC-tubulin的影响 | 第49-50页 |
| 3.21 计算方法及统计学分析 | 第50页 |
| 4 实验结果 | 第50-66页 |
| 4.1 BPV(phen)对细胞增殖和细胞凋亡、细胞焦亡的影响 | 第50-54页 |
| 4.1.1 BPV(phen)对细胞增殖的影响 | 第50-51页 |
| 4.1.2 BPV(phen)诱导细胞凋亡 | 第51-52页 |
| 4.1.3 BPV(phen)诱导细胞焦亡 | 第52-53页 |
| 4.1.4 BPV(phen)对PTEN-AKT信号通路的影响 | 第53-54页 |
| 4.2 BPV(phen)对细胞自噬的影响 | 第54-57页 |
| 4.2.1 BPV(phen)对小鼠肝脏细胞自噬的影响 | 第54-55页 |
| 4.2.2 BPV(phen)抑制自噬体降解（Western Blotting） | 第55-56页 |
| 4.2.3 免疫荧光实验显示 BPV(phen)抑制自噬体降解 | 第56-57页 |
| 4.3 BPV(phen)对P62蛋白水平的影响及其机制 | 第57-64页 |
| 4.3.1 BPV(phen)降低细胞P62蛋白水平 | 第57-58页 |
| 4.3.2 BPV(phen)促进P62降解 | 第58-59页 |
| 4.3.3 自噬抑制剂和/或蛋白酶体抑制剂对 BPV(phen)降低 P62 的影响 | 第59-60页 |
| 4.3.4 自噬抑制剂和/或蛋白酶体抑制剂对BPV(phen)对P62定位于自噬体的影响 | 第60-61页 |
| 4.3.5 BPV(phen)促进P62泛素化 | 第61-62页 |
| 4.3.6 抑制P62蛋白表达导致 α-Tubulin去乙酰化、抑制自噬体降解 | 第62-64页 |
| 4.4 BPV(phen)抑制细胞自噬分子机制 | 第64-66页 |
| 4.4.1 BPV(phen)对微管蛋白的影响 | 第64-65页 |
| 4.4.2 BPV(phen)对P62和HDAC6结合力的影响 | 第65-66页 |
| 5 讨论 | 第66-72页 |
| 6 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-81页 |
| 附录 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 综述 | 第85-105页 |
| 参考文献 | 第97-105页 |
