| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 1 前言 | 第12-22页 |
| 1.1 植物花香物质合成和代谢调控 | 第13-17页 |
| 1.1.1 萜类花香物质合成 | 第13-14页 |
| 1.1.2 苯丙烷类花香物质合成 | 第14-15页 |
| 1.1.3 转录因子对于植物花香物质代谢的调控 | 第15-17页 |
| 1.2 植物对光的代谢响应 | 第17-22页 |
| 1.2.1 光形态建成调控因子COP1的结构 | 第17-19页 |
| 1.2.2 光敏色素抑制子SPA的结构及COP1-SPA的互作 | 第19-21页 |
| 1.2.3 COP1-SPA复合体对下游靶蛋白的调控 | 第21-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-39页 |
| 2.1 植物材料 | 第22-23页 |
| 2.2 药品和试剂 | 第23-25页 |
| 2.2.1 菌株和载体 | 第23-24页 |
| 2.2.2 试剂 | 第24-25页 |
| 2.3 仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.4 ‘西伯利亚’百合主要花香物质的测定 | 第26-27页 |
| 2.4.1 顶空萃取-固相微萃取 | 第26页 |
| 2.4.2 GC-MS规格及程序设置 | 第26-27页 |
| 2.5 基因的克隆 | 第27-31页 |
| 2.5.1 ‘西伯利亚’百合花瓣总RNA的提取及检测 | 第27页 |
| 2.5.2 cDNA（Complentary DNA）单链的合成 | 第27-28页 |
| 2.5.3 cDNA片段的扩增和检测 | 第28-29页 |
| 2.5.4 目的基因片段回收 | 第29-30页 |
| 2.5.5 连接、转化宿主菌 | 第30-31页 |
| 2.5.6 基因序列的测定 | 第31页 |
| 2.6 基因的表达 | 第31-32页 |
| 2.6.1 Real-time QPCR的引物设计 | 第31页 |
| 2.6.2 内参基因的筛选 | 第31页 |
| 2.6.3 RT-q PCR体系配制及程序设置 | 第31-32页 |
| 2.7 亚细胞定位 | 第32-34页 |
| 2.7.1 信号肽及亚细胞定位预测方法 | 第32页 |
| 2.7.2 亚细胞定位载体构建 | 第32-33页 |
| 2.7.3 亚细胞定位载体转化农杆菌 | 第33页 |
| 2.7.4 通过农杆菌侵染洋葱表皮细胞 | 第33-34页 |
| 2.7.5 显微观察 | 第34页 |
| 2.8 酵母双杂交 | 第34-36页 |
| 2.8.1 酵母双杂交载体构建 | 第34页 |
| 2.8.2 载体自激活验证 | 第34-35页 |
| 2.8.3 诱饵载体和捕获载体共转化酵母感受态细胞 | 第35页 |
| 2.8.4 阳性克隆的鉴定 | 第35页 |
| 2.8.5 β -半乳糖苷酶活性测定 | 第35-36页 |
| 2.9 双分子荧光互补 | 第36页 |
| 2.9.1 双分子荧光互补载体构建 | 第36页 |
| 2.9.2 通过农杆菌侵染洋葱表皮细胞 | 第36页 |
| 2.9.3 显微观察 | 第36页 |
| 2.10 病毒干涉和瞬时正义表达 | 第36-39页 |
| 2.10.1 载体的构建 | 第36-38页 |
| 2.10.2 载体通过农杆菌侵染百合 | 第38页 |
| 2.10.3 病毒干涉及过表达后基因的表达 | 第38页 |
| 2.10.4 病毒干涉及过表达后花香的测定 | 第38-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-58页 |
| 3.1‘西伯利亚’百合主要花香物质的释放规律 | 第39-43页 |
| 3.1.1 光照和黑暗处理下主要花香物质的含量的变化 | 第39-41页 |
| 3.1.2 不同光质对‘西伯利亚’百合主要花香物质的影响 | 第41-42页 |
| 3.1.3 光暗转换对百合主要花香物质释放的影响 | 第42-43页 |
| 3.2 百合LoCOP1、LoSPA的结构特征 | 第43-48页 |
| 3.2.1 LoCOP1氨基酸结构特点 | 第43-47页 |
| 3.2.1.1 LoCOP1氨基酸序列比对及系统进化分析 | 第43-45页 |
| 3.2.1.2 LoCOP1蛋白的二级结构预测与亚细胞定位分析 | 第45-47页 |
| 3.2.2 LoSPA氨基酸结构特点 | 第47-48页 |
| 3.3 光暗调节LoCOP1亚细胞定位及其与相关蛋白间的互作 | 第48-54页 |
| 3.3.1 LoCOP1和LoSPA亚细胞定位 | 第48-49页 |
| 3.3.2 光对LoCOP1的亚细胞定位的调节 | 第49-50页 |
| 3.3.3 LoCOP1和LoSPA与LoMYBs的蛋白互作 | 第50-52页 |
| 3.3.4 光对LoCOP1与下游蛋白互作的影响 | 第52-54页 |
| 3.4 LoCOP1和LoSPA的表达特性及其对百合花香释放的影响 | 第54-58页 |
| 3.4.1 LoCOP1和LoSPA的表达特性 | 第54-55页 |
| 3.4.1.1 LoCOP1和LoSPA在不同组织中的表达特性 | 第54页 |
| 3.4.1.2 LoCOP1和LoSPA在不同发育时期的表达分析 | 第54-55页 |
| 3.4.2 BSMV病毒沉默LoCOP1、LoSPA对百合花香的影响 | 第55-57页 |
| 3.4.2.1 BSMV重组质粒通过农杆菌侵染百合花朵后的表型变化 | 第55-56页 |
| 3.4.2.2 病毒沉默LoCOP1对相关基因表达和花香释放的影响 | 第56页 |
| 3.4.2.3 病毒沉默LoSPA对相关基因表达和花香释放的影响 | 第56-57页 |
| 3.4.3 过表达LoCOP1对相关基因表达和花香释放的影响 | 第57-58页 |
| 4 讨论与结论 | 第58-67页 |
| 4.1 讨论 | 第58-65页 |
| 4.1.1 光影响百合花香节律性释放 | 第58-60页 |
| 4.1.2 LoCOP1及其互作因子LoSPA和LoMYBs对百合花香释放的调控 | 第60-65页 |
| 4.2 结论 | 第65-66页 |
| 4.2.1 ‘西伯利亚’百合的主要花香物质释放受光照调控 | 第65页 |
| 4.2.2 LoCOP1和LoSPA可能参与光对花香释放调控作用中 | 第65-66页 |
| 4.3 进一步的研究设想 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-80页 |
| 附录 | 第80-86页 |
