| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 破骨细胞分化 | 第13-14页 |
| 1.2 骨质疏松药物 | 第14-16页 |
| 1.3 miRNA对骨的作用 | 第16-19页 |
| 1.4 非人灵长类动物在疾病研究中的作用 | 第19-21页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-36页 |
| 2.1 仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 试剂 | 第22页 |
| 2.3 器材 | 第22页 |
| 2.4 RNA操作用品的处理 | 第22-23页 |
| 2.5 主要试剂的配制 | 第23-24页 |
| 2.6 骨骼样本中的miR-141 含量与骨密度 | 第24-26页 |
| 2.6.1 人骨骼样本采集 | 第24页 |
| 2.6.2 实验动物准备 | 第24页 |
| 2.6.3 骨组织总RNA提取及质量鉴定 | 第24-25页 |
| 2.6.4 microRNA检测 | 第25-26页 |
| 2.7 给予雌性老年恒河猴miR-141 | 第26-27页 |
| 2.7.1 动物实验设计 | 第26-27页 |
| 2.7.2 骨密度检测 | 第27页 |
| 2.7.3 Micro-CT检测 | 第27页 |
| 2.7.4 HE染色 | 第27页 |
| 2.8 miR-141 对骨吸收的影响 | 第27-29页 |
| 2.8.1 恒河猴破骨细胞体外诱导培养 | 第27-28页 |
| 2.8.2 细胞转染 | 第28页 |
| 2.8.3 Q-PCR检测基因表达情况 | 第28-29页 |
| 2.8.4 TRAP染色 | 第29页 |
| 2.9 miR-141 的作用机制 | 第29-35页 |
| 2.9.1 生物信息学预测miR-141 的靶基因 | 第29-30页 |
| 2.9.2 荧光素酶报告基因载体的构建 | 第30-34页 |
| 2.9.2.1 将包含miR-141 结合位点的CALCR的 3’UTR区域PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.9.2.2 PCR产物纯化 | 第31-32页 |
| 2.9.2.3 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第32-33页 |
| 2.9.2.4 PCR产物连接到psiCHECK2质粒中 | 第33页 |
| 2.9.2.5 转化 | 第33页 |
| 2.9.2.6 提取质粒 | 第33-34页 |
| 2.9.3 荧光素酶活性检测 | 第34页 |
| 2.9.4 CALCR蛋白表达水平检测 | 第34-35页 |
| 2.9.4.1 细胞总蛋白的提取 | 第34-35页 |
| 2.9.4.2 蛋白浓度测定 | 第35页 |
| 2.9.4.3 Western blot检测CALCR蛋白的含量 | 第35页 |
| 2.10 统计学分析 | 第35-36页 |
| 3 结果 | 第36-45页 |
| 3.1 实验对象的临床特点 | 第36-37页 |
| 3.2 miR-141 表达水平与骨密度的关系 | 第37-38页 |
| 3.3 miR-141 增加老年雌性恒河猴的骨量 | 第38-39页 |
| 3.4 给予miR-141 对恒河猴没有明显的副作用 | 第39-40页 |
| 3.5 miR-141 抑制骨吸收 | 第40-41页 |
| 3.6 miR-141 抑制恒河猴破骨细胞生成 | 第41-43页 |
| 3.7 miR-141 通过功能性靶向CALCR调节破骨细胞分化 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 4.1 miR-141 对成骨细胞的影响 | 第45-46页 |
| 4.2 miR-141 的安全性 | 第46页 |
| 4.3 miR-141 靶向CALCR调节破骨细胞分化 | 第46-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附图 | 第55-57页 |
| 硕士期间参与的科研项目 | 第57页 |
