| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第12-20页 |
| 1.1 番茄果实成熟衰老研究现状 | 第12-15页 |
| 1.1.1 番茄果实成熟衰老过程中的激素变化 | 第12-14页 |
| 1.1.2 番茄果实成熟衰老过程中色泽的变化 | 第14-15页 |
| 1.1.3 番茄果实成熟衰老过程中硬度的变化 | 第15页 |
| 1.2 WRKY转录因子家族 | 第15-20页 |
| 1.2.1 WRKY转录因子的结构特征和类型 | 第16-17页 |
| 1.2.2 WRKY转录因子的功能研究 | 第17-18页 |
| 1.2.3 与衰老相关的WRKY转录因子 | 第18-20页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-42页 |
| 2.1 植物材料 | 第20-21页 |
| 2.2 载体及菌株 | 第21-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-42页 |
| 2.3.1 番茄叶片和果实不同发育时期的实时荧光定量 | 第23-27页 |
| 2.3.1.1 番茄叶片和果实不同发育时期的取样 | 第23页 |
| 2.3.1.2 番茄叶片和果实的RNA提取 | 第23-25页 |
| 2.3.1.3 cDNA第一条链的合成 | 第25页 |
| 2.3.1.4 Real-time PCR特异引物设计 | 第25-26页 |
| 2.3.1.5 Real-time PCR | 第26-27页 |
| 2.3.2 亚细胞定位 | 第27-31页 |
| 2.3.2.1 亚细胞定位载体（pCambia35tlegyfps）构建 | 第27-30页 |
| 2.3.2.2 pCambia35tlegyfps重组载体在烟草叶片中的瞬时表达 | 第30-31页 |
| 2.3.3 SlWRKYs对下游基因的调控 | 第31-33页 |
| 2.3.3.1 启动子活性载体（pGreen Ⅱ 0800-LUC）构建 | 第31-32页 |
| 2.3.3.3 荧光值的测定 | 第32-33页 |
| 2.3.4 荧光双分子互补 | 第33-35页 |
| 2.3.4.1 荧光双分子互补载体（pSAT6-c EYFP-C1-B、pSAT6-n(1-174)EYFP-C1）构建 | 第33-34页 |
| 2.3.4.2 原生质体的制备 | 第34页 |
| 2.3.4.3 原生质体的转化及观察 | 第34-35页 |
| 2.3.5 凝胶迁移实验（electrophoretic mobility shift assay, EMSA） | 第35-42页 |
| 2.3.5.1 原核表达载体（pet28b-SlWRKY23、pet28b-SlWRKY53-sumo）构建 | 第35-36页 |
| 2.3.5.2 SlWRKY23、SlWRKY53重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第36-38页 |
| 2.3.5.3 SlWRKY23、SlWRKY53重组蛋白的纯化 | 第38页 |
| 2.3.5.4 下游基因启动子探针的设计 | 第38-39页 |
| 2.3.5.5 重组蛋白与探针的结合反应及检测 | 第39-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-57页 |
| 3.1 番茄成熟衰老过程中WRKY转录因子基因的表达变化 | 第42-44页 |
| 3.1.1 番茄叶片和果实总RNA的提取 | 第42页 |
| 3.1.2 SlWRKYs在番茄叶片不同发育阶段中的表达模式 | 第42-43页 |
| 3.1.3 SlWRKYs在番茄果实不同发育阶段中的表达模式 | 第43-44页 |
| 3.2 番茄WRKY转录因子的亚细胞定位 | 第44-48页 |
| 3.2.1 亚细胞定位重组载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.2 番茄SlWRKYs亚细胞定位分析 | 第45-48页 |
| 3.3 番茄成熟相关基因的启动子对WRKY转录因子的响应 | 第48-51页 |
| 3.3.1 启动子活性检测载体的构建 | 第48页 |
| 3.3.2 乙烯合成相关基因对SlWRKY转录因子的响应 | 第48-49页 |
| 3.3.3 叶绿素降解相关基因对SlWRKY转录因子的响应 | 第49-50页 |
| 3.3.4 番茄红素合成相关基因对SlWRKY转录因子的响应 | 第50-51页 |
| 3.4 SlWRKY转录因子与其他转录因子及SlWRKY转录因子之间的互作 | 第51-55页 |
| 3.4.1 荧光双分子互补载体的构建 | 第51-52页 |
| 3.4.2 SlWRKYs与其他转录因子及SlWRKYs之间的相互作用 | 第52-55页 |
| 3.5 SlWRKY23、SlWRKY53重组蛋白的EMSA反应 | 第55-57页 |
| 3.5.1 原核表达载体的构建 | 第55-56页 |
| 3.5.2 SlWRKY23、SlWRKY53重组蛋白的表达和纯化 | 第56-57页 |
| 3.5.3 SlWRKY23、SlWRKY53重组蛋白与探针的结合 | 第57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 SlWRKYs在番茄叶片和果实不同发育时期的表达模式分析 | 第58-59页 |
| 4.2 SlWRKY转录因子对成熟相关基因的调控 | 第59-60页 |
| 4.3 WRKY转录因子之间及其与其他转录因子之间的互作分析 | 第60-61页 |
| 4.4 SlWRKY23、SlWRKY53蛋白与成熟相关基因启动子的体外结合 | 第61页 |
| 5 结论 | 第61-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
