| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 1 引言 | 第15-25页 |
| 1.1 胃癌及其发病的基本情况 | 第15页 |
| 1.2 RNAI的发现及作用机制 | 第15-16页 |
| 1.2.1 RNAI技术的发现 | 第15-16页 |
| 1.2.2 RNAI的作用机制 | 第16页 |
| 1.3 WNT/Β-CATENIN信号转导通路 | 第16-22页 |
| 1.3.1 WNT/Β-CATENIN信号转导通路概述 | 第16-17页 |
| 1.3.2 WNT/Β-CATENIN信号转导通路的调控机理 | 第17-18页 |
| 1.3.3 WNT/Β-CATENIN信号转导通路的生物学功能 | 第18-20页 |
| 1.3.3.1 WNT/Β-CATENIN在胚胎发育过程中的作用 | 第18页 |
| 1.3.3.2 WNT/Β-CATENIN信号转导通路在细胞分化中的作用 | 第18-20页 |
| 1.3.3.2.1 毛囊的发生与WNT信号通路 | 第19页 |
| 1.3.3.2.2 脂肪细胞分化 | 第19页 |
| 1.3.3.2.3 造血干细胞的自我更新 | 第19-20页 |
| 1.3.4 WNT/Β-CATENIN信号转导通路与疾病的关系 | 第20-21页 |
| 1.3.4.1 WNT/Β-CATENIN信号转导通路与肿瘤的关系 | 第20-21页 |
| 1.3.4.2 WNT信号通路与骨质疏松 | 第21页 |
| 1.3.4.3 WNT信号通路与寄生虫病 | 第21页 |
| 1.3.5 WNT信号通路肿瘤治疗靶点研究 | 第21-22页 |
| 1.4 WNT/Β-CATENIN信号通路辅受体LRP-5 的结构及功能 | 第22-24页 |
| 1.4.1 LRP-5 的结构 | 第22-23页 |
| 1.4.2 LRP-5 的生物学功能 | 第23-24页 |
| 1.4.2.1 LRP-5 参与信号转导通路 | 第23页 |
| 1.4.2.2 LRP-5 与骨密度等相关疾病 | 第23-24页 |
| 1.5 研究内容及目标 | 第24-25页 |
| 1.5.1 LRP-5 在胃癌中的表达 | 第24页 |
| 1.5.2 SIRNA沉默LRP-5 基因表达对胃癌细胞MGC-803生物学功能的影响 | 第24页 |
| 1.5.3 SIRNA沉默LRP-5 对胃癌细胞MGC-803差异蛋白质的影响 | 第24-25页 |
| 2 研究一： LRP-5 在胃癌中的表达 | 第25-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 2.1.1 组织标本 | 第25页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第25页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 实时荧光定量RT-PCR | 第26-27页 |
| 2.2.1.1 总RNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.1.2 CDNA第一链合成 | 第26-27页 |
| 2.2.1.3 MRNA实时荧光定量反应体系 | 第27页 |
| 2.2.2 免疫组化检测及结果测定 | 第27-28页 |
| 2.2.3 统计学分析 | 第28页 |
| 2.3 结果 | 第28-31页 |
| 2.3.1 LRP-5 基因在不同分化程度胃癌组织中的MRNA表达情况 | 第28-29页 |
| 2.3.2 免疫组化实验结果 | 第29-30页 |
| 2.3.3 LRP-5 基因表达与胃腺癌临床特征的关系 | 第30-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 3 研究二：SIRNA沉默LRP-5 对胃癌细胞MGC-803生物学功能的影响 | 第33-69页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第33-47页 |
| 3.1.1 细胞培养及实验分组 | 第33页 |
| 3.1.1.1 细胞培养 | 第33页 |
| 3.1.1.2 实验分组 | 第33页 |
| 3.1.2 质粒载体构建 | 第33-38页 |
| 3.1.2.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.2.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 3.1.2.2.1 OLIGO DESIGNER3.0 | 第34-36页 |
| 3.1.2.2.2 SHDNA模板的退火 | 第36页 |
| 3.1.2.2.3 PGPU6/GFP/NEO载体的线性化 | 第36-37页 |
| 3.1.2.2.4 PGPU6/GFP/NEO-SHRNA载体的构建 | 第37页 |
| 3.1.2.2.5 感受态细胞的制备：（氯化钙法） | 第37页 |
| 3.1.2.2.6 连接产物的转化 | 第37-38页 |
| 3.1.2.2.7 阳性克隆的鉴定与测序 | 第38页 |
| 3.1.3 转染效率评价 | 第38-39页 |
| 3.1.3.1 实验材料及试剂 | 第38页 |
| 3.1.3.2 实验方法 | 第38-39页 |
| 3.1.4 有效干扰质粒筛选 | 第39-42页 |
| 3.1.4.1 QRT-PCR检测 | 第39-41页 |
| 3.1.4.1.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 3.1.4.1.2 实验方法 | 第40-41页 |
| 3.1.4.2 WESTERN BLOT检测 | 第41-42页 |
| 3.1.4.2.1 实验仪器与试剂 | 第41页 |
| 3.1.4.2.2 实验方法 | 第41-42页 |
| 3.1.5 细胞增殖检测（CCK-8 法） | 第42-43页 |
| 3.1.5.1 实验材料及试剂 | 第42页 |
| 3.1.5.2 实验方法 | 第42-43页 |
| 3.1.6 细胞粘附实验 | 第43-44页 |
| 3.1.6.1 实验材料及试剂 | 第43页 |
| 3.1.6.2 实验方法 | 第43-44页 |
| 3.1.7 细胞凋亡实验（流式细胞仪双染检测） | 第44页 |
| 3.1.7.1 实验材料及试剂 | 第44页 |
| 3.1.7.2 实验方法 | 第44页 |
| 3.1.8 细胞周期实验（流式细胞仪PI单染检测） | 第44-45页 |
| 3.1.8.1 实验材料及试剂 | 第44页 |
| 3.1.8.2 实验方法 | 第44-45页 |
| 3.1.9 细胞侵袭实验（TRANSWELL小室基底膜） | 第45-46页 |
| 3.1.9.1 实验材料及试剂 | 第45页 |
| 3.1.9.2 实验方法 | 第45-46页 |
| 3.1.10 细胞迁移实验（划痕法） | 第46-47页 |
| 3.1.10.1 实验材料及试剂 | 第46页 |
| 3.1.10.2 实验方法 | 第46-47页 |
| 3.1.11 统计学分析 | 第47页 |
| 3.2 实验结果 | 第47-67页 |
| 3.2.1 MGC-803细胞培养 | 第47-48页 |
| 3.2.2 质粒载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.2.2.1 质粒图谱 | 第48页 |
| 3.2.2.2 PGPU6/GFP/NEO载体线性化 | 第48页 |
| 3.2.2.3 PGPU6/GFP/NEO重组质粒酶切鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2.2.4 PGPU6/GFP/NEO重组质粒测序鉴定 | 第49页 |
| 3.2.3 转染效率评价 | 第49-50页 |
| 3.2.4 有效干扰质粒筛选 | 第50-57页 |
| 3.2.4.1 细胞照片 | 第50-52页 |
| 3.2.4.2 RT-PCR检测结果 | 第52-56页 |
| 3.2.4.2.1 总RNA提取质量检测 | 第52-53页 |
| 3.2.4.2.2 QRT-PPCR检测MRNA的表达 | 第53-56页 |
| 3.2.4.3 WESTERN BLOT检测结果 | 第56-57页 |
| 3.2.5 SIRNA沉默LRP-5 基因对MGC-803细胞增殖的影响（CCK-8 法） | 第57-58页 |
| 3.2.5.1 细胞照片 | 第57页 |
| 3.2.5.2 各实验组细胞增殖实验 | 第57-58页 |
| 3.2.6 SIRNA沉默LRP-5 基因对MGC-803细胞粘附水平的影响 | 第58-60页 |
| 3.2.6.1 细胞照片 | 第58-59页 |
| 3.2.6.2 粘附水平检测 | 第59-60页 |
| 3.2.7 SIRNA沉默LRP-5 基因对MGC-803细胞凋亡的影响（流式细胞仪双染） | 第60-62页 |
| 3.2.7.1 细胞照片 | 第60-61页 |
| 3.2.7.2 细胞凋亡检测 | 第61-62页 |
| 3.2.8 SIRNA沉默LRP-5 基因对MGC-803细胞周期的影响（流式细胞仪PI单染） | 第62-64页 |
| 3.2.8.1 细胞照片 | 第62-63页 |
| 3.2.8.2 转染PGPU6/GFP/NEO-LRP5重组质粒对MGC-803细胞周期的影响 | 第63-64页 |
| 3.2.9 SIRNA沉默LRP-5 基因对MGC-803细胞侵袭实验的影响（TRANSWELL小室基底膜） | 第64-66页 |
| 3.2.9.1 MGC-803细胞侵袭图片 | 第64-65页 |
| 3.2.9.2 转染后各组MGC-803细胞侵袭的影响 | 第65-66页 |
| 3.2.10 划痕法检测SIRNA沉默LRP-5 基因对MGC-803细胞迁移的影响（划痕法） | 第66-67页 |
| 3.2.10.1 MGC-803细胞迁移图片 | 第66页 |
| 3.2.10.2 转染PGPU6/GFP/NEO-LRP5重组质粒对MGC-803细胞迁移能力的影响 | 第66-67页 |
| 3.3 讨论 | 第67-68页 |
| 3.4 小结 | 第68-69页 |
| 4 研究三：SIRNA沉默LRP-5 对胃癌细胞MGC-803差异蛋白质的影响 | 第69-81页 |
| 4.1 蛋白质双向电泳 | 第69-74页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 4.1.1.1 细胞 | 第69页 |
| 4.1.1.2 主要仪器及设备 | 第69-70页 |
| 4.1.1.3 主要试剂 | 第70页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第70-72页 |
| 4.1.2.1 各组细胞总蛋白质提取 | 第70-71页 |
| 4.1.2.1.1 样品的制备 | 第70页 |
| 4.1.2.1.2 蛋白质定量（分光光度法） | 第70-71页 |
| 4.1.2.2 蛋白质双向电泳 | 第71-72页 |
| 4.1.2.2.1 等电点聚焦电泳（第一向） | 第71页 |
| 4.1.2.2.2 SDS-PAGE电泳（第二向） | 第71-72页 |
| 4.1.2.2.3 凝胶染色 | 第72页 |
| 4.1.2.2.4 凝胶图像扫描 | 第72页 |
| 4.1.3 结果 | 第72-74页 |
| 4.1.3.1 蛋白质定量 | 第72页 |
| 4.1.3.2 2D电泳实验结果 | 第72-73页 |
| 4.1.3.3 差异点分析 | 第73-74页 |
| 4.2 蛋白质质谱鉴定 | 第74-79页 |
| 4.2.1 实验试剂及仪器 | 第74-75页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第75页 |
| 4.2.2.1 制备质谱样品 | 第75页 |
| 4.2.2.2 MALDI-TOF-TOF | 第75页 |
| 4.2.2.3 数据库选择 | 第75页 |
| 4.2.3 结果 | 第75-79页 |
| 4.3 讨论 | 第79-80页 |
| 4.4 小结 | 第80-81页 |
| 5 结论 | 第81页 |
| 6 展望 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 附录 | 第91-94页 |
| 作者简介 | 第94页 |
