| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 英文缩略语 | 第14-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-23页 |
| 1. DNMT3A基因与髓系肿瘤的研究进展 | 第16-23页 |
| 1.1 DNA甲基化与髓系肿瘤 | 第16-17页 |
| 1.2 DNA甲基转移酶 | 第17-18页 |
| 1.3 DNMT3A基因 | 第18-19页 |
| 1.4 DNMT3A基因与髓系肿瘤 | 第19-23页 |
| 1.4.1 AML | 第19-20页 |
| 1.4.2 CML | 第20-22页 |
| 1.4.3 MDS | 第22-23页 |
| 第二章 本论文研究的目的、方法及实验方案的设计、意义 | 第23-26页 |
| 2.1 研究目的 | 第23页 |
| 2.2 研究方法及技术 | 第23-24页 |
| 2.2.1 实时荧光定量PCR（RQ-PCR） | 第23页 |
| 2.2.2 实时定量甲基化特异性PCR（RQ-MSP） | 第23-24页 |
| 2.2.3 亚硫酸氢盐测序 | 第24页 |
| 2.3 实验方案的设计 | 第24-25页 |
| 2.4 本研究的意义 | 第25-26页 |
| 第三章 AML患者中DNMT3A DMR2甲基化研究 | 第26-46页 |
| 3.1 材料 | 第26-28页 |
| 3.1.1 研究对象 | 第26页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 3.1.4 引物 | 第27-28页 |
| 3.2 方法 | 第28-35页 |
| 3.2.1 骨髓单个核细胞分离、RNA及基因组DNA提取 | 第28-29页 |
| 3.2.2 DNA修饰（Epitect? Bisulfite Kit修饰DNA） | 第29-30页 |
| 3.2.3 逆转录 | 第30页 |
| 3.2.4 DNMT3A四种异构体表达的RQ-PCR检测 | 第30-31页 |
| 3.2.5 DNMT3A DMR2的RQ-MSP检测 | 第31-32页 |
| 3.2.6 PCR产物纯化回收 | 第32页 |
| 3.2.7 重组载体构建 | 第32-33页 |
| 3.2.8 重组质粒转化 | 第33页 |
| 3.2.9 重组质粒提取 | 第33-34页 |
| 3.2.10 质粒鉴定、测序 | 第34页 |
| 3.2.11 阳性模板建立 | 第34页 |
| 3.2.12 细胞遗传学检查 | 第34页 |
| 3.2.13 基因突变检测 | 第34-35页 |
| 3.2.14 统计学处理 | 第35页 |
| 3.3 结果 | 第35-44页 |
| 3.3.1 RQ-PCR方法灵敏度﹑重复性﹑特异性 | 第35-36页 |
| 3.3.2 RQ-MSP灵敏度、重复性、特异性 | 第36-38页 |
| 3.3.3 对照组及AML患者中DNMT3A DMR2甲基化水平 | 第38-40页 |
| 3.3.4 AML中DNMT3A DMR2甲基化水平与临床相关性 | 第40-41页 |
| 3.3.5 DNMT3A DMR2甲基化态势与AML患者预后分析 | 第41-43页 |
| 3.3.6 AML患者中DNMT3A甲基化与表达相关性分析 | 第43-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 CML患者中DNMT3A DMR2甲基化研究 | 第46-52页 |
| 4.1 材料 | 第46-47页 |
| 4.1.1 研究对象 | 第46页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第46页 |
| 4.1.4 引物 | 第46-47页 |
| 4.2 方法 | 第47页 |
| 4.2.1 骨髓单个核细胞分离、总RNA及基因组DNA制备 | 第47页 |
| 4.2.2 DNA亚硫酸盐修饰 | 第47页 |
| 4.2.3 DNMT3A DMR2 RQ-MSP检测 | 第47页 |
| 4.2.4 PCR产物的纯化回收 | 第47页 |
| 4.2.5 重组载体构建 | 第47页 |
| 4.2.6 重组质粒转化 | 第47页 |
| 4.2.7 重组质拉提取 | 第47页 |
| 4.2.8 质粒鉴定、测序 | 第47页 |
| 4.2.9 阳性模板建立 | 第47页 |
| 4.2.10 细胞遗传学检查 | 第47页 |
| 4.2.11 统计学处理 | 第47页 |
| 4.3 结果 | 第47-50页 |
| 4.3.1 对照组及CML患者DNMT3A DMR2甲基化水平 | 第47-49页 |
| 4.3.2 DNMT3A DMR2甲基化与临床相关性 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-52页 |
| 第五章 MDS患者中DNMT3A DMR2甲基化研究 | 第52-59页 |
| 5.1 材料 | 第52-53页 |
| 5.1.1 研究对象 | 第52-53页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第53页 |
| 5.1.4 引物 | 第53页 |
| 5.2 方法 | 第53-54页 |
| 5.2.1 骨髓单个核细胞分离、总RNA及基因组DNA制备 | 第53页 |
| 5.2.2 DNA亚硫酸盐修饰 | 第53页 |
| 5.2.3 DNMT3A DMR2 RQ-MSP检测 | 第53页 |
| 5.2.4 PCR产物的纯化回收 | 第53页 |
| 5.2.5 重组载体构建 | 第53页 |
| 5.2.6 重组质粒转化 | 第53页 |
| 5.2.7 重组质拉提取 | 第53页 |
| 5.2.8 质粒鉴定、测序 | 第53页 |
| 5.2.9 阳性模板建立 | 第53页 |
| 5.2.10 细胞遗传学检查 | 第53-54页 |
| 5.2.11 基因突变检测 | 第54页 |
| 5.2.12 统计学处理 | 第54页 |
| 5.3 结果 | 第54-57页 |
| 5.3.1 对照组及MDS患者DNMT3A DMR2甲基化水平 | 第54-56页 |
| 5.3.2 MDS患者中DNMT3A DMR2甲基化与临床相关性 | 第56-57页 |
| 5.3.3 DNMT3A DMR2甲基化态势与MDS患者预后分析 | 第57页 |
| 5.4 讨论 | 第57-59页 |
| 第六章 结论和展望 | 第59-60页 |
| 6.1 主要结论 | 第59页 |
| 6.2 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及其他科研成果 | 第73页 |
