| 摘要 | 第4-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 引言 | 第16-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-28页 |
| 1 鱼类渗透压调节机制 | 第17-18页 |
| 1.1 鱼类渗透压感应以及信号传导 | 第17-18页 |
| 1.2 鱼类环境盐度适应性应答 | 第18页 |
| 2 鱼类渗透压调节器官 | 第18-23页 |
| 2.1 脑 | 第19-21页 |
| 2.2 肾 | 第21-23页 |
| 3 多巴胺系统与鱼类环境盐度适应 | 第23-25页 |
| 3.1 脑多巴胺系统 | 第23-24页 |
| 3.2 肾脏多巴胺系统 | 第24-25页 |
| 4 多巴胺系统与鱼类生殖 | 第25-26页 |
| 5 本研究的目的、意义及主要研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 金钱鱼脑多巴胺的盐度适应性调节机制 | 第28-39页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-33页 |
| 2.1.1 实验鱼与样品采集 | 第28-29页 |
| 2.1.2 RNA提取与cDNA合成 | 第29-30页 |
| 2.1.3 LC-MS/MS检测L-dopa、DA及其代谢产物 | 第30页 |
| 2.1.4 免疫荧光染色 | 第30页 |
| 2.1.5 淡水胁迫下脑D1类受体的表达分析 | 第30-31页 |
| 2.1.6 Western Blotting | 第31-32页 |
| 2.1.7 统计分析 | 第32-33页 |
| 2.2 结果 | 第33-36页 |
| 2.2.1 脑以及血清中L-dopa、DA及其代谢产物含量测定 | 第33页 |
| 2.2.2 脑DRD1组织定位 | 第33-34页 |
| 2.2.3 SaDRD1、SaDRD5以及nkaα 实时表达分析 | 第34-35页 |
| 2.2.4 Western Blotting检测 | 第35-36页 |
| 2.3 讨论 | 第36-39页 |
| 第三章 金钱鱼肾脏盐度适应性调节基因的比较分析与筛选 | 第39-57页 |
| 3.1 材料和方法 | 第39-43页 |
| 3.1.1 实验鱼与样品采集 | 第39-40页 |
| 3.1.2 RNA提取及RNA-Seq文库构建 | 第40页 |
| 3.1.3 转录本除杂、组装以及注释 | 第40-41页 |
| 3.1.4 转录本差异表达分析 | 第41-42页 |
| 3.1.5 RT-qPCR验证参与肾脏盐度适应性调控的多巴胺系统相关基因 | 第42-43页 |
| 3.2 结果 | 第43-51页 |
| 3.2.1 Illumina测序，unigene组装及转录本分析 | 第43-45页 |
| 3.2.2 KOG，GO和KEGG富集分析 | 第45-47页 |
| 3.2.3 差异基因表达分析 | 第47-48页 |
| 3.2.4 金钱鱼肾脏中盐度耐受差异表达基因GO功能分析 | 第48-49页 |
| 3.2.5 通过RT-q PCR对候选基因的转录组测序结果进行验证 | 第49-51页 |
| 3.3 讨论 | 第51-56页 |
| 3.4 结论 | 第56-57页 |
| 第四章 金钱鱼肾脏多巴胺参与低渗胁迫下的渗透压调节 | 第57-74页 |
| 4.1 材料和方法 | 第57-63页 |
| 4.1.1 实验鱼与样品采集 | 第57页 |
| 4.1.2 肾原代细胞培养 | 第57-58页 |
| 4.1.3 多巴胺浓度测定 | 第58-59页 |
| 4.1.4 总RNA提取和cDNA的合成 | 第59页 |
| 4.1.5 SaDRD1全长克隆 | 第59-60页 |
| 4.1.6 序列分析 | 第60页 |
| 4.1.7 SaDRD1 mRNA的组织分布 | 第60-61页 |
| 4.1.8 抗SaDRD1多克隆抗体特异性验证 | 第61页 |
| 4.1.9 免疫组织化学 | 第61页 |
| 4.1.10 肾脏细胞siRNA干扰 | 第61-62页 |
| 4.1.11 肾原代细胞外源性多巴胺暴露实验 | 第62页 |
| 4.1.12 SaDRD1表达和NKA活性的测定 | 第62页 |
| 4.1.13 统计分析 | 第62-63页 |
| 4.2 结果 | 第63-70页 |
| 4.2.1 体内及体外的DA浓度检测 | 第63页 |
| 4.2.2 SaDRD1克隆及序列分析 | 第63-64页 |
| 4.2.3 金钱鱼中DRD1的组织分布 | 第64-65页 |
| 4.2.4 低盐条件下体内D1类受体的mRNA表达 | 第65-66页 |
| 4.2.5 SaDRD1蛋白的抗体特异性定位 | 第66-67页 |
| 4.2.6 肾原代细胞中敲降SaDRD1基因表达引起NKA活性和表达增加 | 第67-69页 |
| 4.2.7 低渗条件下金钱鱼肾脏NKA活性变化 | 第69页 |
| 4.2.8 外源性DA对SaDRD1 mRNA表达和NKA活性的影响 | 第69-70页 |
| 4.3 讨论 | 第70-74页 |
| 第五章 金钱鱼多巴胺系统性腺发育相关基因的表达研究 | 第74-94页 |
| 5.1 材料和方法 | 第75-80页 |
| 5.1.1 实验鱼与样品采集 | 第75页 |
| 5.1.2 组织学观察 | 第75-77页 |
| 5.1.3 RNA提取以及RNA-Seq文库构建 | 第77页 |
| 5.1.4 转录本除杂、组装以及注释 | 第77-78页 |
| 5.1.5 主成分分析（PCA）以及sample to sample聚类分析 | 第78页 |
| 5.1.6 转录本差异表达分析 | 第78页 |
| 5.1.7 权基因共表达网络（WGCNA）分析 | 第78-79页 |
| 5.1.8 RT-qPCR验证 | 第79-80页 |
| 5.2 结果 | 第80-90页 |
| 5.2.1 不同发育时期性腺组织学观察 | 第80-81页 |
| 5.2.2 Illumina测序，unigene组装及转录本分析 | 第81-83页 |
| 5.2.3 KOG功能注释，GO分类和KEGG富集分析 | 第83-85页 |
| 5.2.4 样品分布以及聚类分析 | 第85-86页 |
| 5.2.5 差异基因表达分析 | 第86-87页 |
| 5.2.6 金钱鱼雌雄性腺差异表达基因GO功能以及KEGG富集分析 | 第87页 |
| 5.2.7 WGCNA分析筛选不同发育时期雌雄性腺差异表达基因 | 第87-89页 |
| 5.2.8 候选基因表达RT-qPCR验证 | 第89-90页 |
| 5.3 讨论 | 第90-94页 |
| 总结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-111页 |
| 附录 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
