| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-19页 |
| ·麦芽糖转糖基酶的研究进展 | 第8-9页 |
| ·麦芽糖转糖基酶的理化性质研究 | 第8-9页 |
| ·麦芽糖转糖基酶的应用研究 | 第9页 |
| ·环状糊精的研究进展 | 第9-12页 |
| ·环状糊精的理化性质研究 | 第9-10页 |
| ·制备大环糊精的酶 | 第10-11页 |
| ·大环糊精在工业中的的应用 | 第11-12页 |
| ·毕赤酵母表达系统介绍 | 第12-17页 |
| ·毕赤酵母的生物学性质 | 第13页 |
| ·外源蛋白在毕赤酵母中的表达策略 | 第13-16页 |
| ·影响外源蛋白表达的关键因素 | 第16-17页 |
| ·毕赤酵母表达系统尚存在的问题 | 第17页 |
| ·研究的背景和意义 | 第17-18页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 pPIC9K-MalQ重组表达载体的构建 | 第19-31页 |
| ·材料 | 第20-21页 |
| ·菌株及质粒 | 第20页 |
| ·主要实验试剂与酶 | 第20页 |
| ·主要实验溶液及培养基的配置 | 第20-21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-27页 |
| ·E.coli BL21(DE3)基因组的提取 | 第21-22页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·pPIC9K质粒DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·引物设计 | 第24-25页 |
| ·麦芽糖转糖基酶基因的PCR扩增 | 第25页 |
| ·PCR产物及质粒的双酶切 | 第25-26页 |
| ·双酶切产物的回收连接 | 第26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26-27页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第27页 |
| ·阳性克隆的测序分析 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-30页 |
| ·麦芽糖转糖基酶的PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·pPIC9K质粒DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆子的酶切验证及测序分析 | 第29-30页 |
| ·本章小结 | 第30-31页 |
| 第三章 麦芽糖转糖基酶在毕赤酵母中的分泌表达 | 第31-43页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·菌种与质粒 | 第31页 |
| ·主要试剂 | 第31页 |
| ·主要溶液及培养基的配置 | 第31-33页 |
| ·方法 | 第33-37页 |
| ·毕赤酵母GS115菌株的培养 | 第33-34页 |
| ·毕赤酵母GS115感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·重组质粒pPIC9K-MalQ的线性化 | 第34页 |
| ·电击转化入GS115感受态细胞中 | 第34-35页 |
| ·毕赤酵母GS115重组子表型的鉴定及高拷贝菌株的筛选 | 第35页 |
| ·PCR验证毕赤酵母的整合 | 第35页 |
| ·麦芽糖转糖基酶的诱导表达 | 第35-36页 |
| ·表达产物的转糖基活性分析 | 第36页 |
| ·表达产物酶活的测定 | 第36页 |
| ·表达产物最适反应温度的探究 | 第36页 |
| ·表达产物对温度稳定性分析 | 第36-37页 |
| ·表达产物最适反应pH值的探究 | 第37页 |
| ·表达产物对pH稳定性分析 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-42页 |
| ·PCR验证毕赤酵母GS115的电击转化 | 第37-38页 |
| ·麦芽糖转糖基酶的诱导表达 | 第38页 |
| ·表达产物的活性分析及酶活测定 | 第38-39页 |
| ·表达产物最适反应温度的确定及对温度的稳定性分析 | 第39-41页 |
| ·表达产物最适反应pH的确定及对pH的稳定性分析 | 第41-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 表达产物的应用研究 | 第43-48页 |
| ·材料 | 第44页 |
| ·菌株 | 第44页 |
| ·主要实验仪器与设备 | 第44页 |
| ·主要实验试剂、溶液与培养基 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-46页 |
| ·直链淀粉的制备 | 第44-45页 |
| ·重组毕赤酵母发酵产麦芽糖转糖基酶 | 第45页 |
| ·大环糊精的制备研究 | 第45-46页 |
| ·大环糊精的初步纯化 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第五章 总结与展望 | 第48-50页 |
| ·全文总结 | 第48页 |
| ·创新点 | 第48页 |
| ·展望 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第55页 |