| 摘要 | 第3-5页 |
| Summary | 第5-6页 |
| 缩略词英汉对照表 | 第10-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-18页 |
| 1 水禽细小病毒研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1 水禽细小病毒病简介 | 第12页 |
| 1.2 水禽细小病毒病原学特征 | 第12-13页 |
| 1.2.1 分类地位及形态结构 | 第12-13页 |
| 1.2.2 理化及血凝特性 | 第13页 |
| 1.2.3 宿主范围及培养特性 | 第13页 |
| 1.3 水禽细小病毒分子生物学特征 | 第13-14页 |
| 1.3.1 基因组结构 | 第13-14页 |
| 1.3.2 结构蛋白 | 第14页 |
| 1.3.3 非结构蛋白 | 第14页 |
| 1.4 水禽细小病毒诊断方法 | 第14-15页 |
| 1.5 水禽细小病毒病的预防 | 第15-16页 |
| 2 杆状病毒表达系统概述 | 第16-17页 |
| 2.1 杆状病毒简介 | 第16页 |
| 2.2 杆状病毒表达系统简介 | 第16-17页 |
| 2.3 杆状病毒表达系统在VLPs生产上应用 | 第17页 |
| 3 研究目的及意义 | 第17-18页 |
| 第二章 新型鸭细小病毒DS15株的分离鉴定及全基因组序列测定 | 第18-29页 |
| 1 试验材料 | 第18-19页 |
| 1.1 病料来源 | 第18页 |
| 1.2 鸭胚及试验动物 | 第18页 |
| 1.3 主要试剂及试剂盒 | 第18页 |
| 1.4 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2 试验方法 | 第19-23页 |
| 2.1 病料处理 | 第19页 |
| 2.2 病毒PCR/RT-PCR快速诊断 | 第19-20页 |
| 2.2.1 病毒核酸提取 | 第19页 |
| 2.2.2 引物设计与合成 | 第19-20页 |
| 2.2.3 PCR扩增 | 第20页 |
| 2.3 病毒分离 | 第20页 |
| 2.4 病毒纯化及电镜观察 | 第20页 |
| 2.5 病毒鸭胚半数致死量（ELD50）的测定 | 第20-21页 |
| 2.6 动物回归实验 | 第21页 |
| 2.7 病毒全基因组测序及分析 | 第21-23页 |
| 2.7.1 引物的设计与合成 | 第21页 |
| 2.7.2 PCR扩增各基因片段 | 第21-22页 |
| 2.7.3 扩增片段的克隆 | 第22页 |
| 2.7.4 序列拼接分析 | 第22-23页 |
| 3 结果 | 第23-27页 |
| 3.1 临床样品PCR检测结果 | 第23页 |
| 3.2 病毒的分离 | 第23页 |
| 3.3 病毒电镜观察结果 | 第23页 |
| 3.4 鸭胚半数致死量测定（ELD50） | 第23-24页 |
| 3.5 动物回归试验 | 第24页 |
| 3.6 全基因序列测定与分析 | 第24-27页 |
| 3.6.1 NDPV各片段的PCR扩增 | 第24页 |
| 3.6.2 全基因组结构及分析 | 第24-26页 |
| 3.6.3 NS1蛋白氨基酸序列分析 | 第26-27页 |
| 3.6.4 VP1蛋白氨基酸序列分析 | 第27页 |
| 4 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 VP3蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第29-35页 |
| 1 实验材料 | 第29-30页 |
| 1.1 毒株、菌株及载体及主要试剂 | 第29页 |
| 1.2 主要试剂及试剂盒 | 第29页 |
| 1.3 主要溶液的配制 | 第29-30页 |
| 1.4 实验动物 | 第30页 |
| 2 实验方法 | 第30-31页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第30页 |
| 2.2 VP3基因的扩增 | 第30页 |
| 2.3 重组质粒pGEX-VP3的构建与鉴定 | 第30页 |
| 2.4 VP3基因的诱导表达及鉴定 | 第30-31页 |
| 2.5 重组VP3蛋白的纯化 | 第31页 |
| 2.6 多克隆抗体的制备 | 第31页 |
| 2.7 抗体特异性分析 | 第31页 |
| 3 结果 | 第31-33页 |
| 3.1 VP3基因的克隆及表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.2 重组VP3蛋白的诱导表达分析及纯化 | 第32-33页 |
| 3.3 重组VP3蛋白的Western-blot检测 | 第33页 |
| 3.4 Western-blot鉴定多克隆抗体 | 第33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第四章 VP2蛋白在昆虫细胞中的表达及鉴定 | 第35-45页 |
| 1 实验材料 | 第35页 |
| 1.1 菌株、载体及细胞 | 第35页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第35页 |
| 2 实验方法 | 第35-39页 |
| 2.1 引物设计与合成 | 第35-36页 |
| 2.2 目的基因VP2的扩增 | 第36页 |
| 2.3 重组供体质粒pFastBac HTA-VP2的构建与鉴定 | 第36页 |
| 2.4 重组杆状病毒穿梭质粒Bacmid-HTA-VP2的构建与鉴定 | 第36-37页 |
| 2.4.1 重组供体质粒转化感受态细胞 | 第36页 |
| 2.4.2 重组杆状病毒质粒的提取 | 第36-37页 |
| 2.4.3.重组杆状病毒质粒的鉴定 | 第37页 |
| 2.5 重组杆状病毒rBac-HTA-VP2的拯救 | 第37-38页 |
| 2.5.1 重组杆状病毒质粒转染sf9细胞 | 第37-38页 |
| 2.5.2 重组杆状病毒的传代 | 第38页 |
| 2.5.3 重组杆状病毒TCID50的测定 | 第38页 |
| 2.6 VP2在sf9细胞中的表达与检测 | 第38-39页 |
| 2.6.1 重组VP2蛋白的间接免疫荧光（IFA）检测 | 第38页 |
| 2.6.2 重组VP2蛋白的Western-blot检测 | 第38页 |
| 2.6.3 重组VP2蛋白的纯化及电镜观察 | 第38-39页 |
| 2.7 重组VP2蛋白免疫原性初步研究 | 第39页 |
| 2.7.1 VLPs油乳剂疫苗的制备 | 第39页 |
| 2.7.2 动物免疫试验 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-43页 |
| 3.1 VP2基因的扩增 | 第39页 |
| 3.2 重组供体质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3 重组杆状病毒质粒Bacmid-HTA-VP2的PCR鉴定 | 第40页 |
| 3.4 重组杆状病毒rBac-HTA-VP2的构建 | 第40-41页 |
| 3.5 重组杆状病毒rBac-HTA-VP2毒价测定 | 第41页 |
| 3.6 重组VP2蛋白的IFA检测 | 第41-42页 |
| 3.7 重组蛋白的Western-blot检测 | 第42页 |
| 3.8 VLPs的电镜观察 | 第42-43页 |
| 3.9 VP2特异性抗体水平检测 | 第43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 全文总结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 作者简介 | 第52-53页 |
| 导师简介 | 第53-55页 |
