| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一部分 靶向 3C~(pro)抗肠道病毒 71 型（EV71）小分子抑制剂的发现及其作用机制研究 | 第12-51页 |
| 第1章 手足口病及肠道病毒71型研究概述 | 第13-24页 |
| 1.1 手足口病 | 第13-15页 |
| 1.1.1 手足口病流行病学概况 | 第13-15页 |
| 1.1.2 引起手足口病的病毒 | 第15页 |
| 1.2 EV71病毒 | 第15-20页 |
| 1.2.1 EV71病毒的发现和结构概述 | 第15-17页 |
| 1.2.2 EV71感染的诊断 | 第17-18页 |
| 1.2.3 EV71疫苗和抗病毒抑制剂研究进展 | 第18-20页 |
| 1.3 EV713C蛋白酶（3C~(pro)）结构和功能的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3.1 3C~(pro)结构 | 第20页 |
| 1.3.2 3C~(pro)的功能 | 第20-21页 |
| 1.3.3 靶向 3C~(pro)的抑制剂研究进展 | 第21-22页 |
| 1.4 本课题研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第2章 EV713C~(pro)抑制剂的发现及作用机制研究 | 第24-46页 |
| 2.1 引言 | 第24-25页 |
| 2.2 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.2.1 质粒与菌株（见表 2.1） | 第25页 |
| 2.2.2 多肽（见表 2.2） | 第25页 |
| 2.2.3 阳性化合物AG7088（见表 2.3） | 第25-26页 |
| 2.2.4 细胞（见表 2.4） | 第26页 |
| 2.2.5 实验试剂（见表 2.5） | 第26-27页 |
| 2.3 实验仪器（见表 2.6） | 第27-28页 |
| 2.4 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.4.1 EV713C~(pro)蛋白表达与纯化 | 第28-29页 |
| 2.4.2 EV713C~(pro)酶活测定及抑制剂筛选 | 第29-30页 |
| 2.4.3 化合物抑制剂类型确定 | 第30页 |
| 2.4.4 荧光淬灭实验验证EV713C~(pro)与小分子化合物结合作用 | 第30-31页 |
| 2.4.5 表面等离子共振实验验证EV713C~(pro)与小分子化合物结合作用 | 第31-32页 |
| 2.4.6 点突变实验 | 第32-33页 |
| 2.4.7 圆二色谱实验（CD）确定EV713C~(pro)二级结构 | 第33页 |
| 2.4.8 抑制剂细胞毒性测定 | 第33-34页 |
| 2.4.9 抑制剂抗病毒活性评价 | 第34-36页 |
| 2.5 实验结果 | 第36-44页 |
| 2.5.1 EV713C~(pro)表达纯化结果 | 第36页 |
| 2.5.2 EV713C~(pro)酶活测试结果 | 第36页 |
| 2.5.3 具有抗病毒活性化合物的发现 | 第36-38页 |
| 2.5.4 抗病毒活性化合物DC07090的作用机制研究 | 第38-44页 |
| 2.6 结论与讨论 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-51页 |
| 第二部分 靶向NS2B/NS3~(pro)抗登革病毒抑制剂的发现及其作用机制研究 | 第51-74页 |
| 第3章 登革病毒（DENV）研究概述 | 第52-56页 |
| 3.1 登革病毒（Dengue virus，DENV）简介 | 第52-53页 |
| 3.1.1 登革病毒（DENV） | 第52-53页 |
| 3.1.2 登革病毒引起的疾病 | 第53页 |
| 3.1.3 登革疾病的治疗 | 第53页 |
| 3.2 非结构蛋白 3（NS3）的功能 | 第53-54页 |
| 3.3 NS3蛋白酶（NS3~(pro)）抑制剂研究进展 | 第54-55页 |
| 3.4 本课题研究的目的及意义 | 第55-56页 |
| 第4章 以NS2B/NS3蛋白为靶点的小分子抑制剂的筛选平台的建立和应用 | 第56-66页 |
| 4.1 前言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第56-58页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第56页 |
| 4.2.2 试剂（见表 4.1） | 第56-57页 |
| 4.2.3 实验仪器（见表 4.2） | 第57-58页 |
| 4.2.4 溶液配制 | 第58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-61页 |
| 4.3.1 原核细胞（大肠杆菌）诱导表达NS2B/NS3~(pro) | 第58页 |
| 4.3.2 镍离子亲和层析柱处理 | 第58页 |
| 4.3.3 NS2B/NS3~(pro)的纯化 | 第58-59页 |
| 4.3.4 分子筛（排阻层析） | 第59页 |
| 4.3.5 NS2B/NS3~(pro)酶活检测 | 第59页 |
| 4.3.6 基于酶水平的高通量筛选平台的建立 | 第59页 |
| 4.3.7 NS2B/NS3~(pro)抑制剂的筛选及IC50测定 | 第59-60页 |
| 4.3.8 NS2B/NS3~(pro)抑制剂的细胞毒性检测 | 第60页 |
| 4.3.9 NS2B/NS3~(pro)抑制剂抗病毒活性检测 | 第60-61页 |
| 4.4 结果 | 第61-64页 |
| 4.4.1 蛋白NS2B/NS3~(pro)表达纯化结果 | 第61页 |
| 4.4.2 NS2B/NS3~(pro)酶活检测结果 | 第61-62页 |
| 4.4.3 基于酶水平高通量筛选平台的建立 | 第62页 |
| 4.4.4 NS2B/NS3~(pro)抑制剂筛选结果 | 第62-63页 |
| 4.4.5 NS2B/NS3~(pro)抑制剂细胞毒性检测结果 | 第63-64页 |
| 4.4.6 NS2B/NS3~(pro)抑制剂抗病毒活性检测结果 | 第64页 |
| 4.5 讨论 | 第64-66页 |
| 第5章 以NS2B/NS3~(pro)为靶点的小分子抑制剂的作用机制研究 | 第66-69页 |
| 5.1 引言 | 第66页 |
| 5.2 实验材料 | 第66页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第66页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第66页 |
| 5.2.3 SPR使用溶液配制 | 第66页 |
| 5.3 实验方法 | 第66-67页 |
| 5.3.1 表面等离子共振实验 | 第66-67页 |
| 5.3.2 荧光淬灭实验 | 第67页 |
| 5.4 结果 | 第67-68页 |
| 5.4.1 化合物Y050与NS2B/NS3~(pro)存在直接的相互作用 | 第67-68页 |
| 5.5 讨论 | 第68-69页 |
| 第6章 结论与讨论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 作者简介 | 第74页 |
