| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 符号说明 | 第18-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-31页 |
| 1.1 细菌耐酸性 | 第19-21页 |
| 1.1.1 丙酸概述 | 第19-20页 |
| 1.1.2 耐酸机制的研究 | 第20页 |
| 1.1.3 耐酸基因的研究 | 第20-21页 |
| 1.2 群体感应 | 第21-23页 |
| 1.3 细菌状态的自动切换 | 第23-26页 |
| 1.3.1 Red系统介导的基因敲除 | 第23-24页 |
| 1.3.2 合成生物学 | 第24-26页 |
| 1.4 菌体生长 | 第26-29页 |
| 1.4.1 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶 | 第26-27页 |
| 1.4.2 NAD~+合成途径 | 第27-29页 |
| 1.5 课题研究意义 | 第29-31页 |
| 第二章 大肠杆菌对丙酸的耐受性研究 | 第31-46页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 实验材料 | 第31-32页 |
| 2.2.1 菌株与载体 | 第31-32页 |
| 2.2.2 试剂与仪器 | 第32页 |
| 2.2.3 培养基 | 第32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-36页 |
| 2.3.1 细菌基因组DNA的少量制备 | 第32-33页 |
| 2.3.2 琼脂糖凝聚电泳 | 第33页 |
| 2.3.3 质粒载体的提取 | 第33-34页 |
| 2.3.4 PCR产物的回收 | 第34页 |
| 2.3.5 琼脂糖切胶回收 | 第34页 |
| 2.3.6 双酶切、连接体系 | 第34-35页 |
| 2.3.7 热击法转化E.coii | 第35页 |
| 2.3.8 MIC值测定 | 第35-36页 |
| 2.3.9 发酵重组工程菌 | 第36页 |
| 2.3.10 SDS-PAGE分析 | 第36页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第36-44页 |
| 2.4.1 大肠杆菌E.coli BL21基因组的提取 | 第36-37页 |
| 2.4.2 耐酸工程菌的构建 | 第37-39页 |
| 2.4.3 耐酸工程菌的SDS-PAGE | 第39-40页 |
| 2.4.4 丙酸梯度耐酸工程菌计数 | 第40-42页 |
| 2.4.5 E.coli BL21(pET-rpoS)的耐酸能力 | 第42-43页 |
| 2.4.6 E.coli BL21(pET-rpoS)的生长情况 | 第43-44页 |
| 2.4.7 E.coli BL21(pET-rpoS)MIC值的测定 | 第44页 |
| 2.5 本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 大肠杆菌自动切换的研究 | 第46-58页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 菌株与载体 | 第46页 |
| 3.2.2 试剂与仪器 | 第46-47页 |
| 3.2.3 培养基 | 第47页 |
| 3.3 实验方法 | 第47-49页 |
| 3.3.1 电击法转化 | 第47页 |
| 3.3.2 Red重组 | 第47-48页 |
| 3.3.3 单酶切体系 | 第48页 |
| 3.3.4 生物传感分析仪操作 | 第48-49页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第49-56页 |
| 3.4.1 大肠杆菌E.coli BL21 △ldhA的构建 | 第49-50页 |
| 3.4.2 质粒pET-P_(luxI)-gfp的构建 | 第50-52页 |
| 3.4.3 质粒pET-P_(luxI)-ldhA的构建 | 第52页 |
| 3.4.4 质粒pUC- luxl- luxR的构建 | 第52页 |
| 3.4.5 程菌的构建 | 第52-54页 |
| 3.4.6 自动切换系统验证 | 第54页 |
| 3.4.7 自动切换生产乳酸 | 第54-56页 |
| 3.5 本章小结 | 第56-58页 |
| 第四章 大肠杆菌体生长的研究 | 第58-68页 |
| 4.1 引言 | 第58页 |
| 4.2 实验材料 | 第58-59页 |
| 4.2.1 菌株与载体 | 第58-59页 |
| 4.2.2 试剂与仪器 | 第59页 |
| 4.2.3 培养基 | 第59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-60页 |
| 4.3.1 PEPC酶活的测定 | 第59-60页 |
| 4.3.2 高效液相色谱仪检测 | 第60页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第60-66页 |
| 4.4.0 集胞藻6803基因组的提取 | 第60-61页 |
| 4.4.1 质粒pET-pepc的构建 | 第61页 |
| 4.4.2 质粒pUC-pncB-nadD-nadE的构建 | 第61-63页 |
| 4.4.3 工程菌的构建 | 第63页 |
| 4.4.4 工程菌的SDS-PAGE | 第63-64页 |
| 4.4.5 工程菌的生长曲线 | 第64-65页 |
| 4.4.6 工程菌的代谢产物 | 第65-66页 |
| 4.4.7 PEPC酶活的测定 | 第66页 |
| 4.5 本章小结 | 第66-68页 |
| 第五章 总结与展望 | 第68-71页 |
| 5.1 总结 | 第68-69页 |
| 5.2 创新点 | 第69页 |
| 5.3 展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 附录Ⅰ 本实验所用试剂 | 第76-78页 |
| 附录Ⅱ 本实验所用仪器 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第80-81页 |
| 导师和作者简介 | 第81-82页 |
| 附件 | 第82-83页 |
