| 致谢 | 第5-11页 |
| 摘要 | 第11-13页 |
| 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 骨髓间充质干细胞的研究进展 | 第14-18页 |
| 1.1 骨髓间充质干细胞的发现和命名 | 第14页 |
| 1.2 骨髓间充质干细胞的生物学特性 | 第14-15页 |
| 1.2.1 骨髓间充质干细胞的形态学特征 | 第14页 |
| 1.2.2 骨髓间充质干细胞的增殖特点 | 第14页 |
| 1.2.3 骨髓间充质干细胞的分化特性 | 第14-15页 |
| 1.2.4 骨髓间充质干细胞的免疫特性 | 第15页 |
| 1.2.5 骨髓间充质干细胞的表面标记物 | 第15页 |
| 1.3 骨髓间充质干细胞的分离培养 | 第15-16页 |
| 1.4 骨髓间充质干细胞的鉴定 | 第16页 |
| 1.5 骨髓间充质干细胞的临床应用 | 第16-17页 |
| 1.5.1 骨髓间充质干细胞在组织工程中的应用 | 第16-17页 |
| 1.5.2 骨髓间充质干细胞在基因治疗中的应用 | 第17页 |
| 1.5.3 骨髓间充质干细胞在细胞治疗中的应用 | 第17页 |
| 1.6 展望 | 第17-18页 |
| 2 骨髓间充质干细胞向胰岛细胞的定向分化 | 第18-19页 |
| 2.1 诱导剂法 | 第18页 |
| 2.2 共培养法 | 第18页 |
| 2.3 转基因法 | 第18-19页 |
| 3 DNA甲基化与胰岛细胞分化调控 | 第19-22页 |
| 3.1 DNA甲基化与基因的表达调控 | 第19页 |
| 3.2 DNA甲基化与干细胞分化 | 第19页 |
| 3.3 DNA甲基化调控干细胞分化为胰岛细胞 | 第19-22页 |
| 3.3.1 胰岛细胞发育关键调控基因 | 第19-21页 |
| 3.3.1.1 Foxa2 | 第19页 |
| 3.3.1.2 Mafa | 第19-20页 |
| 3.3.1.3 Pdx-1 | 第20页 |
| 3.3.1.4 Ngn3 | 第20页 |
| 3.3.1.5 Pax4 | 第20页 |
| 3.3.1.6 Pax6 | 第20页 |
| 3.3.1.7 Nkx2.2 | 第20页 |
| 3.3.1.8 Nkx6.1 | 第20-21页 |
| 3.3.2 DNA甲基化调控胰岛细胞分化关键调控基因的表达 | 第21-22页 |
| 试验一 兔骨髓间充质干细胞分离、培养、鉴定及生物学特性的研究 | 第22-31页 |
| 引言 | 第22页 |
| 1 材料与方法 | 第22-25页 |
| 1.1 试验材料 | 第22-23页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第22页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 1.1.3 主要仪器与器械 | 第22-23页 |
| 1.2 主要溶液配制 | 第23-24页 |
| 1.2.1 PBS缓冲液的配制 | 第23页 |
| 1.2.2 消化液的配制 | 第23页 |
| 1.2.3 双抗的分装冻存 | 第23页 |
| 1.2.4 FBS的分装冻存 | 第23页 |
| 1.2.5 不含FBS的DMEM/F12培养液的配制 | 第23页 |
| 1.2.6 含10%FBS的DMEM/F12培养液的配制 | 第23-24页 |
| 1.2.7 0.2%TritonX-100的配制 | 第24页 |
| 1.2.8 1mol/L盐酸的配制 | 第24页 |
| 1.2.9 1mol/L氢氧化钠的配制 | 第24页 |
| 1.3 试验方法 | 第24-25页 |
| 1.3.1 兔BMSCs的分离培养 | 第24页 |
| 1.3.2 兔BMSCs的传代培养 | 第24页 |
| 1.3.3 细胞计数 | 第24-25页 |
| 1.3.4 免疫细胞化学法鉴定兔BMSCs | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-29页 |
| 2.1 原代培养 | 第25-27页 |
| 2.2 传代培养 | 第27-28页 |
| 2.3 兔BMSCs的鉴定 | 第28-29页 |
| 3 讨论 | 第29-30页 |
| 3.1 兔骨髓间充质干细胞的分离培养 | 第29-30页 |
| 3.2 兔骨髓间充质干细胞的鉴定 | 第30页 |
| 4 小结 | 第30-31页 |
| 试验二 DMSO联合高糖于体外诱导兔骨髓间充质干细胞分化为胰岛细胞的研究 | 第31-47页 |
| 引言 | 第31页 |
| 1 材料与方法 | 第31-37页 |
| 1.1 试验材料 | 第31-32页 |
| 1.1.1 试验对象 | 第31页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第31-32页 |
| 1.1.3 主要仪器与器械 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂配制 | 第32-33页 |
| 1.2.1 第一阶段诱导液（含1%DMSO的无血清DMEM/F12培养液）的配制 | 第32页 |
| 1.2.2 第二阶段诱导液（无血清H-DMEM培养液）的配制 | 第32-33页 |
| 1.2.3 双硫腙贮存液（10mg/mL）的配制 | 第33页 |
| 1.2.4 0.2%TritonX-100的配制 | 第33页 |
| 1.2.5 10%正常山羊血清封闭液的配制 | 第33页 |
| 1.3 试验方法 | 第33-37页 |
| 1.3.1 DMSO联合高糖于体外诱导兔BMSCs向胰岛细胞的分化 | 第33页 |
| 1.3.1.1 细胞准备 | 第33页 |
| 1.3.1.2 兔BMSCs向胰岛细胞分化的诱导方法 | 第33页 |
| 1.3.2 兔BMSCs向胰岛细胞分化的检测 | 第33-37页 |
| 1.3.2.1 形态学观察 | 第33页 |
| 1.3.2.2 双硫腙染色检测 | 第33-34页 |
| 1.3.2.3 细胞免疫荧光染色检测 | 第34页 |
| 1.3.2.4 胰岛细胞相关基因表达的检测 | 第34-37页 |
| 1.3.3 统计分析 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-43页 |
| 2.1 DMSO联合高糖诱导兔BMSCs分化的形态学变化 | 第37-38页 |
| 2.2 双硫腙染色检测结果 | 第38-39页 |
| 2.3 细胞免疫荧光染色检测结果 | 第39-41页 |
| 2.4 普通PCR检测胰岛细胞相关基因的表达 | 第41-42页 |
| 2.5 荧光定量PCR检测胰岛细胞相关基因表达量的变化 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-46页 |
| 3.1 Foxa2、Nestin和Pax6基因能否作为兔BMSCs向胰岛细胞诱导分化成功的标志基因 | 第43-44页 |
| 3.2 诱导对象和诱导液底液的选择 | 第44-45页 |
| 3.2.1 诱导对象的选择 | 第44页 |
| 3.2.2 诱导液底液的选择 | 第44-45页 |
| 3.3 诱导成分对兔BMSCs向胰岛细胞分化的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.1 DMSO对兔BMSCs向胰岛细胞分化的影响 | 第45页 |
| 3.3.2 高糖对兔BMSCs向胰岛细胞分化的影响 | 第45-46页 |
| 4 小结 | 第46-47页 |
| 试验三 5-aza-dc体外诱导兔骨髓间充质干细胞分化为胰岛细胞的研究 | 第47-60页 |
| 引言 | 第47页 |
| 1 材料与方法 | 第47-51页 |
| 1.1 试验材料 | 第47-48页 |
| 1.1.1 试验对象 | 第47页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第47-48页 |
| 1.1.3 主要仪器与器械 | 第48页 |
| 1.2 主要试剂配制 | 第48-49页 |
| 1.2.1 第一阶段诱导液（含 1%DMSO的无血清DMEM/F12培养液）的配制 | 第48-49页 |
| 1.2.2 第二阶段诱导液（无血清H-DMEM培养液）的配制 | 第49页 |
| 1.2.3 5-aza-dc次母液（100umol/L）的配制 | 第49页 |
| 1.2.4 MTT工作液（5mg/mL）的配制 | 第49页 |
| 1.2.5 双硫腙贮存液（10mg/mL）的配制 | 第49页 |
| 1.2.6 0.2%TritonX-100 的配制 | 第49页 |
| 1.2.7 10%正常山羊血清封闭液的配制 | 第49页 |
| 1.3 试验方法 | 第49-51页 |
| 1.3.1 MTT法检测 5-aza-dc对兔BMSCs体外增殖能力的影响 | 第49-50页 |
| 1.3.2 体外定向诱导分化 | 第50页 |
| 1.3.2.1 细胞准备 | 第50页 |
| 1.3.2.2 兔BMSCs向胰岛细胞分化的诱导方法 | 第50页 |
| 1.3.3 兔BMSCs向胰岛细胞分化的检测 | 第50-51页 |
| 1.3.3.1 形态学观察 | 第50页 |
| 1.3.3.2 双硫腙染色检测 | 第50页 |
| 1.3.3.3 细胞免疫荧光染色检测 | 第50页 |
| 1.3.3.4 胰岛细胞相关基因表达的检测 | 第50-51页 |
| 1.3.4 统计分析 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-58页 |
| 2.1 MTT法检测细胞增殖能力，确定最适 5-aza-dc干预浓度 | 第51-52页 |
| 2.2 诱导后细胞形态学观察 | 第52-53页 |
| 2.3 双硫腙染色结果 | 第53-54页 |
| 2.4 细胞免疫荧光染色结果 | 第54-56页 |
| 2.5 5-aza-dc对诱导过程中胰岛细胞相关基因表达的影响 | 第56-58页 |
| 2.5.1 普通PCR检测诱导过程中胰岛细胞相关基因的表达 | 第56-57页 |
| 2.5.2 荧光定量PCR检测 5-aza-dc对诱导过程中胰岛细胞相关基因表达量的影响 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-59页 |
| 3.1 5-aza-dc对兔BMSCs体外增殖能力的影响 | 第58-59页 |
| 3.2 5-aza-dc对兔BMSCs向胰岛细胞分化的影响 | 第59页 |
| 3.2.1 5-aza-dc对诱导分化过程中兔BMSCs形态的影响 | 第59页 |
| 3.2.2 5-aza-dc对诱导过程中胰岛细胞相关基因表达的影响 | 第59页 |
| 4 小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-73页 |
| 英文缩写词表 | 第73-74页 |
| ABSTRACT | 第74-76页 |
