| 致谢 | 第4-8页 |
| 英文缩略表 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 文献综述 | 第11-19页 |
| 1 猪流行性腹泻病毒研究进展 | 第11-15页 |
| 1.1 前言 | 第11页 |
| 1.2 PEDV流行病学 | 第11-12页 |
| 1.3 PEDV病原特性 | 第12页 |
| 1.4 PEDV分子和遗传特征 | 第12-13页 |
| 1.5 PEDV分子流行病学调查 | 第13-14页 |
| 1.6 PEDV致病机理 | 第14-15页 |
| 1.6.1 PEDV组织嗜性 | 第14-15页 |
| 1.6.2 PEDV引起的免疫应答 | 第15页 |
| 2.干扰素刺激因子ISG15研究进展 | 第15-19页 |
| 2.1 前言 | 第15页 |
| 2.2 ISG15的发现 | 第15页 |
| 2.3 ISG15的泛素化修饰系统 | 第15-16页 |
| 2.4 ISG15与病毒相互作用 | 第16-19页 |
| 2.4.1 ISG15通路与病毒的相互作用 | 第16-17页 |
| 2.4.2 病毒对ISG15的拮抗作用 | 第17页 |
| 2.4.3 游离ISG15与病毒的相互作用 | 第17-19页 |
| 试验研究 | 第19-44页 |
| 试验一 河南省 2014-2015 年猪流行性腹泻病毒流行株遗传进化分析 | 第19-29页 |
| 1 材料与方法 | 第19-20页 |
| 1.1 样本 | 第19页 |
| 1.2 主要试剂 | 第19-20页 |
| 1.3 引物 | 第20页 |
| 1.4 样本处理及RNA提取 | 第20页 |
| 1.5 反转录及PCR扩增 | 第20页 |
| 1.6 PCR产物的克隆及测序 | 第20页 |
| 1.7 序列分析 | 第20页 |
| 2 结果与分析 | 第20-27页 |
| 2.1 PEDV河南流行株S基因序列信息 | 第20-24页 |
| 2.2 PEDV河南流行株S基因核苷酸及推导氨基酸序列同源性分析 | 第24-25页 |
| 2.3 基于S基因的PEDV遗传进化分析 | 第25-26页 |
| 2.4 PEDV河南流行株S基因的N-糖基化位点变化 | 第26-27页 |
| 2.5 PEDV河南流行株S基因的跨膜区域变化 | 第27页 |
| 3.讨论 | 第27-29页 |
| 试验二 稳定过表达猪ISG15基因Vero细胞系的建立 | 第29-37页 |
| 1 材料与方法 | 第29-30页 |
| 1.1 细胞、菌株与质粒 | 第29页 |
| 1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 1.3 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2 方法 | 第30-32页 |
| 2.1 引物合成 | 第30页 |
| 2.2 Vero细胞的复苏 | 第30页 |
| 2.3 Vero细胞的传代 | 第30页 |
| 2.4 Vero细胞嘌呤霉素最佳筛选浓度测定 | 第30页 |
| 2.5 细胞转染 | 第30-31页 |
| 2.6 细胞系筛选 | 第31页 |
| 2.7 q PCR对ISG15基因的转录水平检测 | 第31页 |
| 2.8 western-blot对ISG15基因的表达稳定性检测 | 第31-32页 |
| 2.9 Vero细胞的冻存 | 第32页 |
| 3.结果 | 第32-35页 |
| 3.1 猪ISG15基因荧光定量方法的验证及猴GAPDH荧光定量方法的构建 | 第32-33页 |
| 3.1.1 PEDV S基因实时荧光定量PCR产物特异性 | 第32页 |
| 3.1.2 PEDV S基因实时荧光定量PCR的扩增效率 | 第32-33页 |
| 3.2 Vero细胞嘌呤霉素最佳筛选浓度测定 | 第33页 |
| 3.3 表达ISG15基因的Vero细胞系构建 | 第33页 |
| 3.4 ISG15表达稳定性鉴定 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 试验三 ISG15和PEDV相互作用的初步研究 | 第37-44页 |
| 1 材料 | 第37页 |
| 1.1 病毒和细胞 | 第37页 |
| 1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-39页 |
| 2.1 引物设计 | 第37页 |
| 2.2 PEDV S基因荧光定量方法构建 | 第37-38页 |
| 2.3 PEDV的增殖与培养 | 第38页 |
| 2.4 病毒效价的测定 | 第38页 |
| 2.5 PEDV增殖动态的测定 | 第38页 |
| 2.6 PEDV增殖对ISG15表达的影响 | 第38-39页 |
| 2.7 过表达ISG15对PEDV增殖的影响 | 第39页 |
| 2.7.1 荧光定量检测过表达ISG15对PEDV增殖的影响 | 第39页 |
| 2.7.2 蚀斑法检测过表达ISG15对PEDV增殖的影响 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-42页 |
| 3.1 PEDV S基因荧光定量方法的构建 | 第39-40页 |
| 3.1.1 实时荧光定量PCR产物特异性 | 第39页 |
| 3.1.2 实时荧光定量 PCR 基因的扩增效率 | 第39-40页 |
| 3.2 PEDV病毒效价及生长曲线的测定 | 第40页 |
| 3.3 PEDV增殖对ISG15表达的影响 | 第40-41页 |
| 3.4 过表达ISG15对PEDV增殖的影响 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-44页 |
| 全文总结 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-54页 |
| 附：作者读研期间发表文章 | 第54-55页 |
| ABSTRACT | 第55-57页 |
