| 摘要 | 第8-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 缩语列表 | 第17-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-35页 |
| 1. 促雄腺的功能研究 | 第21-23页 |
| 2. 促雄腺及性腺组织学切片研究进展 | 第23-25页 |
| 2.1 促雄腺的组织学研究进展 | 第23-24页 |
| 2.2 甲壳类动物性腺组织学研究 | 第24-25页 |
| 3. 甲壳类动物转录组及microRNA研究进展 | 第25-29页 |
| 3.1 甲壳类动物转录组构建的研究进展 | 第26-28页 |
| 3.1.1 甲壳类动物性别决定与生殖发育相关转录组的研究进展 | 第26页 |
| 3.1.2 甲壳类动物免疫应答相关转录组的研究进展 | 第26-27页 |
| 3.1.3 日本沼虾转录组的研究进展 | 第27-28页 |
| 3.2 甲壳类动物microRNA文库构建的研究进展 | 第28-29页 |
| 3.2.1 甲壳类动物性别决定与生殖发育相关microRNA文库的研究进展 | 第28页 |
| 3.2.2 甲壳类动物免疫应答相关microRNA文库的研究进展 | 第28-29页 |
| 3.2.3 日本沼虾microRNA文库的研究进展 | 第29页 |
| 4. 重要性别相关基因研究进展 | 第29-33页 |
| 4.1 Foxl2基因的研究进展 | 第30-32页 |
| 4.2 Slow-tonic S2 tropomyosin (Sst)基因及Slow tropomyosin isoform(Sti)基因研究进展 | 第32-33页 |
| 5. 研究的目的、意义及整体思路 | 第33-35页 |
| 第二章 日本沼虾变态后发育过程促雄腺及性腺发育组织学研究 | 第35-49页 |
| 1. 材料 | 第35-37页 |
| 1.1 实验用虾 | 第35页 |
| 1.2 试剂 | 第35-36页 |
| 1.3 仪器 | 第36-37页 |
| 2. 方法 | 第37-40页 |
| 2.1 石蜡切片实验虾处理 | 第37-40页 |
| 2.1.1 组织样品处理 | 第37页 |
| 2.1.2 组织样品处理 | 第37-40页 |
| 2.2 类固醇激素测定 | 第40页 |
| 2.2.1 组织样品处理 | 第40页 |
| 2.2.2 类固醇激素测定 | 第40页 |
| 3. 结果 | 第40-46页 |
| 3.1 促雄腺的结构及变化 | 第40-41页 |
| 3.2 精巢的结构及变化 | 第41-42页 |
| 3.3 卵巢的结构及变化 | 第42-45页 |
| 3.4 睾酮与17β-雌二醇的测定 | 第45-46页 |
| 4. 讨论 | 第46-47页 |
| 5. 结论 | 第47-49页 |
| 第三章 日本沼虾促雄腺转录组的构建及性别决定相关基因的筛选 | 第49-69页 |
| 1. 材料与方法 | 第49-50页 |
| 1.1 实验用虾 | 第50页 |
| 1.2 试剂 | 第50页 |
| 1.3 仪器 | 第50页 |
| 2. 方法 | 第50-52页 |
| 2.1 RNA提取 | 第50-51页 |
| 2.2 转录组测序 | 第51页 |
| 2.3 转录组结果分析 | 第51页 |
| 2.4 表达分析 | 第51-52页 |
| 3. 结果与分析 | 第52-64页 |
| 3.1 日本沼虾促雄腺转录组数据分析 | 第52-54页 |
| 3.2 基因功能注释 | 第54-57页 |
| 3.3 日本沼虾性别相关同源基因的筛选 | 第57-60页 |
| 3.4 日本沼虾性别相关候选基因的筛选 | 第60-62页 |
| 3.5 分子标记的开发 | 第62-64页 |
| 4. 讨论 | 第64-68页 |
| 4.1 日本沼虾促雄腺转录组分析 | 第64-65页 |
| 4.2 日本沼虾性别相关同源基因筛选 | 第65-67页 |
| 4.3 日本沼虾性别相关候选基因筛选 | 第67页 |
| 4.4 日本沼虾标记筛选 | 第67-68页 |
| 5. 结论 | 第68-69页 |
| 第四章 日本沼虾促雄腺microRNA文库的构建以及性别相关microRNA的筛选 | 第69-81页 |
| 1. 材料 | 第69页 |
| 1.1 试验用虾 | 第69页 |
| 1.2 试剂 | 第69页 |
| 1.3 仪器 | 第69页 |
| 2. 方法 | 第69-71页 |
| 2.1 RNA提取 | 第70页 |
| 2.2 小RNA文库构建及测序 | 第70页 |
| 2.3 小RNA文库数据分析 | 第70页 |
| 2.4 日本沼虾microRNA文库靶基因预测 | 第70-71页 |
| 3. 结果 | 第71-77页 |
| 3.1 序列长度分布 | 第71页 |
| 3.2 小RNA功能注释 | 第71-72页 |
| 3.3 日本沼虾促雄腺microRNA靶基因注释 | 第72-77页 |
| 4. 讨论 | 第77-78页 |
| 4.1 日本沼虾促雄腺microRNA文库分析 | 第77页 |
| 4.2 日本沼虾促雄腺microRNA注释 | 第77页 |
| 4.3 日本沼虾促雄腺性别相关microRNA筛选 | 第77-78页 |
| 5. 结论 | 第78-81页 |
| 第五章 日本沼虾叉头框蛋白L2基因(Foxl2)的克隆与表达研究 | 第81-103页 |
| 1. 材料 | 第81-82页 |
| 1.1 实验用虾 | 第81-82页 |
| 1.2 试剂 | 第82页 |
| 1.3 仪器 | 第82页 |
| 2. 方法 | 第82-90页 |
| 2.1 日本沼虾精巢卵巢组织总RNA的提取 | 第82-83页 |
| 2.1.1 实验样品的预处理 | 第82-83页 |
| 2.1.2 精巢卵巢组织总RNA的提取 | 第83页 |
| 2.1.3 提取的总RNA的浓度测定及质量检测 | 第83页 |
| 2.2 日本沼虾精巢卵巢总RNA第一链cDNA的合成 | 第83页 |
| 2.3 日本沼虾Foxl2基因中间序列的获得及验证 | 第83-84页 |
| 2.4 PCR产物的切胶回收克隆测序 | 第84-85页 |
| 2.4.1 扩增产物的纯化 | 第84页 |
| 2.4.2 载体连接反应 | 第84页 |
| 2.4.3 固体培养基及液体培养基的制备 | 第84页 |
| 2.4.4 产物转化 | 第84页 |
| 2.4.5 阳性克隆筛选: | 第84-85页 |
| 2.5 日本沼虾Foxl2基因cDNA序列全长克隆 | 第85-86页 |
| 2.5.1 日本沼虾Foxl2基因3'端序列扩增 | 第85页 |
| 2.5.2 日本沼虾Foxl2基因5'端序列扩增 | 第85-86页 |
| 2.6 生物信息学分 | 第86页 |
| 2.7 日本沼虾Foxl2基因不同成体组织及不同发育时期定量表达研究 | 第86-88页 |
| 2.7.1 引物设计 | 第86页 |
| 2.7.2 日本沼虾不同成体组织及不同发育时期样品的采集 | 第86-87页 |
| 2.7.3 日本沼虾不同组织的总RNA提取 | 第87页 |
| 2.7.4 不同成体组织cDNA模版的制备 | 第87页 |
| 2.7.5 实时荧光定量PCR反应 | 第87-88页 |
| 2.7.6 数据分析: | 第88页 |
| 2.8 日本沼虾Foxl2基因的RNAi研究 | 第88-90页 |
| 2.8.1 日本沼虾Foxl2基因双链 | 第88页 |
| 2.8.2 日本沼虾精巢总RNA第一链cDNA的合成 | 第88页 |
| 2.8.3 日本沼虾Foxl2基因开放阅读框中间片段扩增 | 第88页 |
| 2.8.4 PCR产物的切胶回收克隆测序 | 第88页 |
| 2.8.5 日本沼虾Foxl2基因双链dsRNA的合成 | 第88-89页 |
| 2.8.6 双链dsRNA的质量检测和浓度观察 | 第89页 |
| 2.8.7 日本沼虾Foxl2基因的干扰实验 | 第89页 |
| 2.8.8 日本沼虾RNAi实验的定量表达分析 | 第89页 |
| 2.8.9 性腺发育指数的计算 | 第89-90页 |
| 3. 结果 | 第90-99页 |
| 3.1 日本沼虾Foxl2基因cDNA序列的结构特征 | 第90-93页 |
| 3.2 日本沼虾Foxl2基因氨基酸序列分析 | 第93-94页 |
| 3.3 日本沼虾Foxl2基因的组织表达分析 | 第94-95页 |
| 3.4 日本沼虾Foxl2基因在胚胎、出膜后、变态后发育过程中的表达研究 | 第95-96页 |
| 3.5 日本沼虾Foxl2基因的功能研究 | 第96-99页 |
| 4. 讨论 | 第99-101页 |
| 4.1 日本沼虾Foxl2基因的序列分析 | 第99页 |
| 4.2 日本沼虾Foxl2基因不同发育时期定量表达研究 | 第99-100页 |
| 4.3 日本沼虾Foxl2基因不同雌雄组织中定量表达研究 | 第100页 |
| 4.4 日本沼虾Foxl2基因RNAi功能研究 | 第100-101页 |
| 5. 结论 | 第101-103页 |
| 第六章 日本沼虾两种原肌球蛋白基因的克隆与表达研究 | 第103-121页 |
| 1. 材料 | 第103页 |
| 1.1 实验用虾 | 第103页 |
| 1.2 主要试剂 | 第103页 |
| 1.3 仪器 | 第103页 |
| 2. 方法 | 第103-106页 |
| 2.1 日本沼虾促雄腺总RNA的提取 | 第103页 |
| 2.2 日本沼虾促雄腺总RNA第一链cDNA的合成 | 第103-104页 |
| 2.3 日本沼虾Sst和Sti基因中间片段的获得及验证 | 第104页 |
| 2.4 日本沼虾Sst基因及Sti基因cDNA序列全长克隆 | 第104-105页 |
| 2.4.1 日本沼虾Sst基因及Sti基因3'端序列扩增 | 第104-105页 |
| 2.4.2 日本沼虾Sst基因及Sti基因5'端序列扩增 | 第105页 |
| 2.5 生物信息学分析 | 第105页 |
| 2.6 日本沼虾Sst基因及Sti基因不同成体组织及不同发育时期定量表达研究 | 第105-106页 |
| 3. 结果 | 第106-118页 |
| 3.1 日本沼虾Sst和Sti基因cDNA序列的结构特征 | 第106-107页 |
| 3.2 生物信息学分析 | 第107页 |
| 3.3 相似度比较分析 | 第107-116页 |
| 3.4 亲缘进化树分析 | 第116页 |
| 3.5 日本沼虾Sst和Sti基因的组织表达研究 | 第116-117页 |
| 3.6 日本沼虾Sst和Sti基因的发育时期表达研究 | 第117-118页 |
| 4. 讨论 | 第118-120页 |
| 4.1 日本沼虾Sst和Sti基因的序列分析 | 第118-119页 |
| 4.2 日本沼虾Sst和Sti基因的不同组织定量表达分析 | 第119-120页 |
| 4.3 日本沼虾Sst和Sti基因的不同发育时期定量表达分析 | 第120页 |
| 5. 结论 | 第120-121页 |
| 全文总结 | 第121-123页 |
| 创新点 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-143页 |
| 致谢 | 第143-145页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 | 第145-146页 |
