| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略词注释表 | 第6-9页 |
| 1 绪论 | 第9-17页 |
| 1.1 甘露聚糖与甘露聚糖降解酶系 | 第9-10页 |
| 1.1.1 甘露聚糖 | 第9-10页 |
| 1.1.2 甘露聚糖降解酶系 | 第10页 |
| 1.2 β-甘露聚糖酶的来源和应用 | 第10-11页 |
| 1.2.1 来源 | 第10-11页 |
| 1.2.2 应用 | 第11页 |
| 1.3 β-甘露聚糖酶的结构与功能 | 第11-16页 |
| 1.3.1 β-甘露聚糖酶的结构特征 | 第11-12页 |
| 1.3.2 β-甘露聚糖酶的性质 | 第12-14页 |
| 1.3.3 β-甘露聚糖酶结构与功能的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.4 立题依据和主要研究内容 | 第16-17页 |
| 1.4.1 立题依据 | 第16页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第16-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第17页 |
| 2.1.2 菌株、质粒和工具酶 | 第17页 |
| 2.1.3 试剂、溶液和培养基 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要网站和软件 | 第18页 |
| 2.1.5 引物设计与合成 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-25页 |
| 2.2.1 AuMan5A的结构分析 | 第18-19页 |
| 2.2.2 突变酶的理性设计 | 第19页 |
| 2.2.3 突变酶基因的构建和表达 | 第19-21页 |
| 2.2.4 酶蛋白的生化分析和分离纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.5 酶学性质的测定 | 第22-23页 |
| 2.2.6 单点突变酶的构建和分析 | 第23页 |
| 2.2.7 原酶及突变酶在乳酸克鲁维酵母中的表达验证 | 第23-25页 |
| 3 结果与讨论 | 第25-44页 |
| 3.1 AuMan5A结构分析 | 第25-27页 |
| 3.1.1 AuMan5A的三维结构 | 第25页 |
| 3.1.2 底物结合凹槽的分析和突变位点的选择 | 第25-27页 |
| 3.2 突变酶的理性设计 | 第27-28页 |
| 3.3 突变酶基因的构建和表达 | 第28-31页 |
| 3.3.1 突变基因和重组表达质粒的构建 | 第28-29页 |
| 3.3.2 重组毕赤酵母的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.3.3 重组酶的生化分析和分离纯化 | 第30-31页 |
| 3.4 重组酶酶学性质的测定 | 第31-34页 |
| 3.4.1 pH对酶活性和稳定性的影响 | 第31-32页 |
| 3.4.2 温度对酶活性和稳定性的影响 | 第32-33页 |
| 3.4.3 熔解温度的测定 | 第33-34页 |
| 3.4.4 重组酶的动力学常数测定 | 第34页 |
| 3.4.5 讨论 | 第34页 |
| 3.5 单点突变酶的构建和分析 | 第34-39页 |
| 3.5.1 单点突变酶的构建 | 第35-36页 |
| 3.5.2 单点突变酶的性质测定 | 第36-37页 |
| 3.5.3 结构与功能的分析 | 第37-39页 |
| 3.6 Auman5A和Auman5A-Af在乳酸克鲁维酵母中表达 | 第39-44页 |
| 3.6.1 重组表达质粒的构建 | 第39-40页 |
| 3.6.2 重组乳酸克鲁维酵母的构建、筛选和表达 | 第40-41页 |
| 3.6.3 表达产物的分析 | 第41-42页 |
| 3.6.4 基因表达分析 | 第42-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-47页 |
| 主要结论 | 第44-45页 |
| 展望 | 第45-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第53页 |