| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第15-35页 |
| 1.1 类胶原蛋白Scl2 | 第15-17页 |
| 1.1.1 Scl2的重组表达 | 第16页 |
| 1.1.2 Scl2的生物学功能 | 第16页 |
| 1.1.3 Scl2在重组表达及纯化上的应用 | 第16-17页 |
| 1.2 碱性成纤维细胞生长因子bFGF | 第17-20页 |
| 1.2.1 bFGF的结构和功能 | 第17-18页 |
| 1.2.2 bFGF的理化性质 | 第18页 |
| 1.2.3 bFGF的分布 | 第18页 |
| 1.2.4 bFGF的主要生物学功能 | 第18-19页 |
| 1.2.5 bFGF的基因工程研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3 胰岛素样生长因子-1 | 第20-23页 |
| 1.3.1 IGF-1的结构特性 | 第21页 |
| 1.3.2 IGF-1的生物学功能与应用 | 第21-22页 |
| 1.3.3 IGF-1的基因工程研究进展 | 第22-23页 |
| 1.4 人表皮生长因子 | 第23-24页 |
| 1.4.1 hEGF的结构和理化性质 | 第23页 |
| 1.4.2 hEGF的生物学功能与应用 | 第23-24页 |
| 1.4.3 hEGF的基因工程研究进展 | 第24页 |
| 1.5 肠激酶 | 第24-25页 |
| 1.5.1 肠激酶的结构特点 | 第24-25页 |
| 1.5.2 肠激酶的理化和酶学特点 | 第25页 |
| 1.5.3 肠激酶的生理功能 | 第25页 |
| 1.6 大肠杆菌重组表达系统与高密度发酵 | 第25-30页 |
| 1.6.1 蛋白质可溶表达策略 | 第26-28页 |
| 1.6.2 大肠杆菌高密度发酵 | 第28-30页 |
| 1.7 蛋白质的层析分离技术及应用 | 第30-32页 |
| 1.7.1 亲和层析 | 第30-31页 |
| 1.7.2 离子交换层析 | 第31页 |
| 1.7.3 凝胶过滤层析 | 第31-32页 |
| 1.8 本课题的研究思路与主要研究内容 | 第32-35页 |
| 第二章 重组大肠杆菌融合表达FGF的优化研究 | 第35-49页 |
| 2.1 引言 | 第35页 |
| 2.2 实验材料 | 第35-39页 |
| 2.2.1 质粒与菌株 | 第36页 |
| 2.2.2 工具酶与主要试剂 | 第36页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第36-37页 |
| 2.2.4 培养基及试剂配制 | 第37-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-42页 |
| 2.3.1 E.coli感受态的制备 | 第39页 |
| 2.3.2 基因的设计和合成 | 第39页 |
| 2.3.3 引物的设计和合成 | 第39-40页 |
| 2.3.4 融合蛋白表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 2.3.5 表达菌株的构建与验证 | 第41页 |
| 2.3.6 Scl2-M-hbFGF的诱导表达 | 第41页 |
| 2.3.7 Scl2-M-hbFGF表达条件的优化 | 第41-42页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第42-48页 |
| 2.4.1 重组质粒与重组菌的构建 | 第42-43页 |
| 2.4.2 重组菌的诱导表达 | 第43-44页 |
| 2.4.3 重组菌的诱导表达条件的优化 | 第44-48页 |
| 2.5 本章小结 | 第48-49页 |
| 第三章 融合蛋白酶切工具酶(肠激酶)在毕赤酵母中的表达研究 | 第49-57页 |
| 3.1 引言 | 第49-50页 |
| 3.2 实验材料 | 第50-52页 |
| 3.2.1 质粒与菌株 | 第50页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第50页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第50页 |
| 3.2.4 培养基配制 | 第50-51页 |
| 3.2.5 试剂配制 | 第51-52页 |
| 3.3 实验方法 | 第52-54页 |
| 3.3.1 GS115-EK的诱导表达培养 | 第52页 |
| 3.3.2 肠激酶的分离纯化 | 第52-53页 |
| 3.3.3 SDS-PAGE电泳验证 | 第53页 |
| 3.3.4 肠激酶的活性验证 | 第53-54页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第54-55页 |
| 3.4.1 肠激酶的表达及分离纯化 | 第54页 |
| 3.4.2 肠激酶的活性验证 | 第54-55页 |
| 3.5 本章小结 | 第55-57页 |
| 第四章 hbFGF的分离纯化及生物活性检测 | 第57-69页 |
| 4.1 引言 | 第57-58页 |
| 4.2 实验材料 | 第58-59页 |
| 4.2.1 质粒与菌株 | 第58页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第58页 |
| 4.2.3 主要仪器 | 第58页 |
| 4.2.4 培养基及试剂配制 | 第58-59页 |
| 4.3 实验方法 | 第59-62页 |
| 4.3.1 发酵液的预处理 | 第59页 |
| 4.3.2 Scl2-M-hbFGF融合蛋白亲和层析纯化 | 第59页 |
| 4.3.3 蛋白脱盐 | 第59-60页 |
| 4.3.4 Scl2-M-hbFGF融合蛋白pH沉淀纯化 | 第60页 |
| 4.3.5 肠激酶酶切融合蛋白Scl2-M-hbFGF | 第60页 |
| 4.3.6 离子交换层析分离成熟hbFGF | 第60-61页 |
| 4.3.7 hbFGF生物活性的检测 | 第61-62页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第62-68页 |
| 4.4.1 Scl2-M-hbFGF融合蛋白的亲和纯化 | 第62-63页 |
| 4.4.2 pH沉淀法纯化融合蛋白Scl2-M-hbFGF | 第63-65页 |
| 4.4.3 肠激酶酶切融合蛋白Scl2-M-hbFGF | 第65页 |
| 4.4.4 离子交换层析分离hbFGF | 第65-67页 |
| 4.4.5 hbFGF的生物活性分析 | 第67-68页 |
| 4.5 本章小结 | 第68-69页 |
| 第五章 以甘油为碳源的hbFGF的放大培养 | 第69-79页 |
| 5.1 引言 | 第69页 |
| 5.2 实验材料 | 第69-71页 |
| 5.2.1 质粒与菌株 | 第69页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第69-70页 |
| 5.2.3 培养基的配制 | 第70-71页 |
| 5.3 实验方法 | 第71-73页 |
| 5.3.1 一级种子的制备 | 第71页 |
| 5.3.2 二级种子的制备 | 第71页 |
| 5.3.3 分批发酵与控制 | 第71页 |
| 5.3.4 分批补料发酵与控制 | 第71-72页 |
| 5.3.5 甘油浓度的测定 | 第72-73页 |
| 5.3.6 hbFGF的规模制备 | 第73页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第73-76页 |
| 5.4.1 分批发酵 | 第73-74页 |
| 5.4.2 分批补料发酵 | 第74-75页 |
| 5.4.3 hbFGF的规模制备 | 第75-76页 |
| 5.5 本章小结 | 第76-79页 |
| 第六章 重组大肠杆菌中新型胶原蛋白融合表达其他生长因子的研究 | 第79-87页 |
| 6.1 引言 | 第79-80页 |
| 6.2 实验材料 | 第80页 |
| 6.2.1 质粒与菌株 | 第80页 |
| 6.2.2 工具酶与主要试剂 | 第80页 |
| 6.2.3 主要仪器 | 第80页 |
| 6.2.4 培养基及试剂配制 | 第80页 |
| 6.3 实验方法 | 第80-82页 |
| 6.3.1 基因的设计和合成 | 第80-81页 |
| 6.3.2 引物的设计和合成 | 第81页 |
| 6.3.3 融合蛋白表达载体的构建 | 第81-82页 |
| 6.3.4 表达菌株的构建与验证 | 第82页 |
| 6.3.5 重组蛋白Scl2-M-IGF-1和Scl2-M-hEGF的诱导表达 | 第82页 |
| 6.3.6 重组蛋白Scl2-M-IGF-1表达条件的优化 | 第82页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第82-86页 |
| 6.4.1 重组质粒与重组菌的构建 | 第82-83页 |
| 6.4.2 重组蛋白的诱导表达 | 第83-84页 |
| 6.4.3 重组蛋白Scl2-M-IGF-1诱导表达条件的优化 | 第84-86页 |
| 6.5 本章小结 | 第86-87页 |
| 第七章 结论与展望 | 第87-91页 |
| 7.1 结论 | 第87-88页 |
| 7.2 展望 | 第88-91页 |
| 参考文献 | 第91-103页 |
| 作者简介 | 第103页 |
