| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 副结核分枝杆菌与牛副结核病简介 | 第12-15页 |
| 1.1.1 副结核分枝杆菌 | 第12页 |
| 1.1.2 牛副结核病在生产上引起的危害以及与人类的关系 | 第12-15页 |
| 1.2 牛副结核检测方法 | 第15-19页 |
| 1.2.1 细菌学检测 | 第15-16页 |
| 1.2.2 分子生物学检测 | 第16-17页 |
| 1.2.3 皮肤变态反应（SDTH） | 第17页 |
| 1.2.4 IFN-γ释放试验（IGRA） | 第17-18页 |
| 1.2.5 酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第18页 |
| 1.2.6 补体结合试验（CFT） | 第18-19页 |
| 1.2.7 琼脂扩散试验（AGID） | 第19页 |
| 1.3 总结与展望 | 第19-20页 |
| 1.4 研究目的 | 第20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-41页 |
| 2.1 细菌培养方法的建立 | 第20-22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第21-22页 |
| 2.1.3 培养基验证 | 第22页 |
| 2.2 副结核特异性片段IS900的PCR方法的建立 | 第22-25页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第23-25页 |
| 2.3 副结核分枝杆菌特异性抗原的克隆、表达与纯化 | 第25-32页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.3.2 副结核特异性重组蛋白克隆 | 第27-31页 |
| 2.3.3 副结核分枝杆菌重组蛋白的诱导表达与纯化 | 第31-32页 |
| 2.4 副结核特异性蛋白MAP1345与MAP0862的串联表达 | 第32-34页 |
| 2.4.1 引物设计 | 第33页 |
| 2.4.2 片段扩增与目的片段回收 | 第33页 |
| 2.4.3 重叠延伸PCR | 第33页 |
| 2.4.4 重组质粒构建与诱导表达 | 第33-34页 |
| 2.4.5 SDS-PAGE鉴定 | 第34页 |
| 2.4.6 包涵体形式目的蛋白纯化 | 第34页 |
| 2.4.7 Western Blot鉴定 | 第34页 |
| 2.5 副结核特异性序列人工合成多肽 | 第34-35页 |
| 2.6 重组蛋白、多肽间接ELISA方法的建立 | 第35-37页 |
| 2.6.1 实验血清 | 第35页 |
| 2.6.2 实验用试剂与溶液配制 | 第35-36页 |
| 2.6.3 主要仪器设备 | 第36页 |
| 2.6.4 间接ELISA操作步骤 | 第36页 |
| 2.6.5 ELISA条件优化 | 第36-37页 |
| 2.7 细菌分离培养方法对临床样本牛进行检测 | 第37-38页 |
| 2.7.1 实验材料 | 第37页 |
| 2.7.2 实验方法 | 第37-38页 |
| 2.8 PCR方法对临床验本牛进行检测 | 第38-39页 |
| 2.8.1 实验材料 | 第38页 |
| 2.8.2 实验方法 | 第38-39页 |
| 2.9 ELISA应用 | 第39-40页 |
| 2.9.1 实验材料 | 第39页 |
| 2.9.2 试验方法 | 第39-40页 |
| 2.10 皮肤变态反应检测 | 第40-41页 |
| 2.10.1 实验材料 | 第40页 |
| 2.10.2 试验方法 | 第40页 |
| 2.10.3 结果判定步骤 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-59页 |
| 3.1 副结核培养基制备 | 第41-42页 |
| 3.2 基于副结核特异性片段IS900的PCR方法的建立 | 第42-43页 |
| 3.3 副结核分枝杆菌特异性抗原的克隆、表达与纯化 | 第43-47页 |
| 3.3.1 PCR扩增结果 | 第43-44页 |
| 3.3.2 重组蛋白SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第44-47页 |
| 3.3.3 Western blot鉴定结果 | 第47页 |
| 3.4 ELISA方法的建立 | 第47-52页 |
| 3.4.1 优化后的ELISA条件 | 第47-48页 |
| 3.4.2 阴阳性血清临界值的确立 | 第48-49页 |
| 3.4.3 特异性试验结果 | 第49页 |
| 3.4.4 符合性试验 | 第49-52页 |
| 3.5 牛感染副结核后不同时期几种副结核特异性蛋白的抗体变化规律 | 第52-57页 |
| 3.6 检测方法在临床上的应用 | 第57-59页 |
| 3.6.1 细菌分离培养方法对临床样本牛进行检测 | 第57页 |
| 3.6.2 PCR方法对300头临床牛进行检测 | 第57-58页 |
| 3.6.3 ELISA应用 | 第58页 |
| 3.6.4 皮试试验检测山东地区牛 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-64页 |
| 4.1 细菌分离培养以及PCR鉴定 | 第59-60页 |
| 4.2 重组蛋白在血清学诊断中的应用 | 第60-62页 |
| 4.3 皮肤变态反应检测结果 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
| 发表文章 | 第73页 |
