| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第11-21页 |
| 1.1 顺铂概述 | 第11页 |
| 1.2 铂类化疗药物的概述 | 第11-13页 |
| 1.2.1 顺铂 | 第12页 |
| 1.2.2 卡铂 | 第12页 |
| 1.2.3 奥沙利铂 | 第12-13页 |
| 1.3 顺铂的药物作用机制 | 第13页 |
| 1.4 顺铂耐药性的因素 | 第13-16页 |
| 1.4.1 DNA自我损伤修复 | 第13-15页 |
| 1.4.4 抗凋亡蛋白与肿瘤抑制蛋白 | 第15-16页 |
| 1.5 PTN基因的发现 | 第16页 |
| 1.6 PTN的基因结构与蛋白表达 | 第16-17页 |
| 1.7 PTN的生物学功能 | 第17-19页 |
| 1.7.1 促有丝分裂作用 | 第17页 |
| 1.7.2 促血管形成作用 | 第17-18页 |
| 1.7.3 促进细胞轴突的生长活性 | 第18页 |
| 1.7.4 参与骨、肾、肺和牙齿的发育过程 | 第18-19页 |
| 1.7.5 与癌相关活性 | 第19页 |
| 1.7.6 抗凋亡活性 | 第19页 |
| 1.8 立题依据 | 第19-21页 |
| 第2章 材料和方法 | 第21-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第21页 |
| 2.1.2 实验主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要试剂与材料 | 第22-23页 |
| 2.1.4 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.5 引物及shRNA | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-36页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第23-24页 |
| 2.2.2 重组质粒的构建 | 第24-27页 |
| 2.2.3 外源PTN蛋白的表达 | 第27-29页 |
| 2.2.4 纯化外源PTN蛋白 | 第29-30页 |
| 2.2.5 外源PTN蛋白促细胞生长实验 | 第30-31页 |
| 2.2.6 PTN蛋白刺激对PC3细胞顺铂敏感性的影响 | 第31页 |
| 2.2.7 流式细胞仪检测不同浓度的PTN蛋白对顺铂处理的PC3细胞凋亡率的影响 | 第31-32页 |
| 2.2.8 PTN-shRNA对PTNmRNA及蛋白水平的影响 | 第32-34页 |
| 2.2.9 检查PTN沉默的PC3细胞对顺铂的敏感性 | 第34页 |
| 2.2.10 流式细胞术检测抑制PTN表达后顺铂对PC3细胞凋亡的影响 | 第34-35页 |
| 2.2.11 检查顺铂作用PTN沉默的PC3细胞中C-PARP的表达 | 第35-36页 |
| 第3章 实验结果 | 第36-48页 |
| 3.1 PTN表达载体的构建及鉴定 | 第36-37页 |
| 3.1.1 在Bxpc-3 细胞中获得PTN基因片段 | 第36页 |
| 3.1.2 构建pTracer-EF/V5-His-PTN质粒并酶切鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2 外源PTN蛋白的表达 | 第37-39页 |
| 3.2.1 转染条件的摸索 | 第37-38页 |
| 3.2.2 检查外源PTN在 293T细胞中的表达 | 第38-39页 |
| 3.2.3 检查外源PTN蛋白表达最佳时间点 | 第39页 |
| 3.3 PTN外源蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 3.4 外源PTN蛋白的促细胞生长活性检测 | 第40页 |
| 3.5 PTN蛋白降低了PC3细胞对顺铂的敏感性 | 第40-41页 |
| 3.6 流式细胞术检测不同浓度的PTN对细胞凋亡的影响 | 第41-42页 |
| 3.7 抑制PC3细胞中PTN的表达 | 第42-45页 |
| 3.7.1 PTN-shRNA质粒转染PC3细胞 | 第42-43页 |
| 3.7.2 检查PTN RNA水平的沉默 | 第43-44页 |
| 3.7.3 检查PTN蛋白水平的沉默 | 第44-45页 |
| 3.8 沉默PTN的PC3细胞对顺铂敏感性增强 | 第45-46页 |
| 3.9 流式细胞术检查顺铂对PTN沉默的PC3细胞凋亡的影响 | 第46-47页 |
| 3.10 western blot检查Cleaved-PARP | 第47-48页 |
| 第4章 讨论 | 第48-51页 |
| 第5章 结论 | 第51-52页 |
| 作者及科研成果介绍 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
