| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩写词表 | 第9-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| 1 枝孢样枝孢霉研究概况 | 第15-17页 |
| ·枝孢样枝孢霉生物特性研究 | 第15页 |
| ·枝孢样枝孢霉的免疫学研究 | 第15-16页 |
| ·枝孢样枝孢霉的感染现状 | 第16-17页 |
| 2 微波诱变在微生物育种方面的研究 | 第17-18页 |
| 3 NTG(亚硝基胍)诱变诱变在微生物育种方面的研究 | 第18页 |
| 4 基因差异表达分析研究 | 第18-24页 |
| ·基因差异表达的概念 | 第18-19页 |
| ·研究基因差异表达的技术 | 第19-24页 |
| ·消减杂交法(SH) | 第19-20页 |
| ·基因表达系列分析(SAGE) | 第20页 |
| ·mRNA差异显示(DDRT-PCR) | 第20-21页 |
| ·基因表达序列标签(ESTs) | 第21页 |
| ·抑制性消减杂交(SSH) | 第21-24页 |
| 5 选题背景及研究的目的意义 | 第24-25页 |
| 第二章 大熊猫源枝孢样枝孢霉的诱变及其致病性研究 | 第25-40页 |
| 1 材料与方法 | 第25-27页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·菌种及实验动物 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·亚硝基胍(NTG)溶液配制 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-27页 |
| ·菌种选育程序 | 第26页 |
| ·野生型枝孢样枝孢霉的活化 | 第26-27页 |
| ·枝孢样枝孢霉孢子悬液的制备 | 第27页 |
| 2 大熊猫源枝孢样枝孢霉的诱变 | 第27-28页 |
| ·微波诱变 | 第27-28页 |
| ·微波诱变剂量的确定 | 第27页 |
| ·微波诱变 | 第27-28页 |
| ·亚硝基胍诱变 | 第28页 |
| ·亚硝基胍诱变剂量的确定 | 第28页 |
| ·亚硝基胍诱变 | 第28页 |
| ·复合诱变 | 第28页 |
| ·突变株的筛选 | 第28页 |
| 3 突变株的生长状态和形态的观察 | 第28-29页 |
| ·菌株活化 | 第28-29页 |
| ·菌落形态学观察 | 第29页 |
| ·产孢数量的测定和菌落生长速度 | 第29页 |
| ·显微镜观察 | 第29页 |
| ·菌丝宽度及孢子大小测定 | 第29页 |
| 4 动物实验 | 第29-30页 |
| ·免疫抑制小鼠模型的建立 | 第29页 |
| ·小鼠致病性实验 | 第29-30页 |
| ·小鼠的感染率比较 | 第30页 |
| 5 结果与分析 | 第30-38页 |
| ·微波诱变影响 | 第30-31页 |
| ·NTG诱变剂量及致死率 | 第31页 |
| ·NTG+微波复合诱变 | 第31-32页 |
| ·突变株生物鉴定 | 第32页 |
| ·野生型与突变株的形态变化 | 第32-34页 |
| ·野生型和突变型菌落生长速度的变化 | 第34页 |
| ·野生型和突变型菌落产孢数量的变化 | 第34-35页 |
| ·菌株的显微镜下形态 | 第35页 |
| ·野生型和突变型菌丝直径与孢子大小的变化 | 第35页 |
| ·小鼠免疫抑制模型的建立 | 第35-36页 |
| ·小鼠的剖检及逆培养 | 第36页 |
| ·逆培养的分子生物学鉴定 | 第36页 |
| ·小鼠的皮肤组织病理学观察 | 第36-37页 |
| ·小鼠的感染率比较 | 第37-38页 |
| 6 讨论 | 第38-40页 |
| ·微波、NTG对枝孢样枝孢霉的影响 | 第38页 |
| ·野生型和突变型表型与生长特性的变化分析 | 第38-39页 |
| ·野生型和突变型对小鼠致病性的分析 | 第39-40页 |
| 第三章 枝孢样枝孢霉野生型和突变株差异基因片段的筛选、鉴定与生物信息学分析 | 第40-60页 |
| 1 试验材料 | 第40-41页 |
| ·菌株、载体 | 第40页 |
| ·主要试剂和仪器设备 | 第40-41页 |
| 2 试验方法 | 第41-50页 |
| ·枝孢样枝孢霉野生型和突变株细胞总RNA的提取 | 第41-43页 |
| ·菌株的活化及培养 | 第41页 |
| ·总RNA提取 | 第41-42页 |
| ·总RNA质量的检验 | 第42页 |
| ·mRNA的分离 | 第42-43页 |
| ·消减文库构建 | 第43-49页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第43页 |
| ·cDNA第二链合成 | 第43-44页 |
| ·Rsa Ⅰ酶切 | 第44-45页 |
| ·加接头 | 第45-46页 |
| ·第一轮杂交 | 第46-47页 |
| ·第二轮杂交 | 第47-48页 |
| ·第一轮PCR | 第48页 |
| ·第二轮PCR | 第48-49页 |
| ·PCR纯化 | 第49页 |
| ·连pMD18T载体 | 第49页 |
| ·转化DH5a | 第49页 |
| ·消减文库鉴定 | 第49-50页 |
| ·库容量鉴定 | 第49页 |
| ·重组率和插入片段长度鉴定 | 第49-50页 |
| 3 试验结果 | 第50-58页 |
| ·总RNA提取 | 第50页 |
| ·mRNA的分离 | 第50页 |
| ·RsaⅠ酶切 | 第50-51页 |
| ·连接效率的测定 | 第51页 |
| ·第二轮PCR扩增结果 | 第51-52页 |
| ·菌落PCR鉴定插入率和插入长度测定 | 第52-53页 |
| ·库容量检测 | 第53页 |
| ·枝孢样枝孢霉野生型和突变型差异片段测定结果 | 第53-54页 |
| ·枝孢样枝孢霉野生型与突变型差异消减片段生物信息学分析 | 第54-58页 |
| ·BLAST同源分析 | 第54-57页 |
| ·DNA序列分析结果 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-83页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第83页 |
