| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-21页 |
| 第一章 革兰氏阴性菌血红素转运系统及hemophore的研究进展 | 第13-21页 |
| 1. 革兰氏阴性菌血红素转运系统 | 第13-19页 |
| ·血红素来源 | 第14-15页 |
| ·血红素摄取 | 第15-16页 |
| ·直接的血红素摄取 | 第15页 |
| ·Hemophore介导的血红素摄取 | 第15-16页 |
| ·血红素转运 | 第16-18页 |
| ·血红素受体 | 第16页 |
| ·TonB系统 | 第16-17页 |
| ·ABC转运体 | 第17页 |
| ·血红素的储存和降解 | 第17-18页 |
| ·血红素转运的调控 | 第18-19页 |
| ·Fur调控 | 第18页 |
| ·σ调控 | 第18页 |
| ·复合调控 | 第18-19页 |
| 2. 革兰氏阴性菌hemophore的研究进展 | 第19-21页 |
| ·HasA型hemophore | 第19页 |
| ·HuxA型hemophore | 第19页 |
| ·HmuY型hemophore | 第19-21页 |
| 第二部分 试验部分 | 第21-68页 |
| 第二章 鸭疫里默氏杆菌hemophore的发现与鉴定 | 第21-32页 |
| 1 试验材料 | 第21-24页 |
| ·菌株 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·试剂配制 | 第22-23页 |
| ·细菌培养相关试剂配制 | 第22页 |
| ·蛋白电泳相关试剂配制 | 第22-23页 |
| ·Western-blot相关试剂配制 | 第23页 |
| ·其它相关试剂配制 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| 2 试验方法 | 第24-26页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌分泌蛋白的提取 | 第24页 |
| ·胞外heme绑定蛋白的鉴定 | 第24-25页 |
| ·Heme琼脂糖亲和层析 | 第25页 |
| ·野生型hemophore分泌的优化 | 第25页 |
| ·野生型hemophore稳定性的检测 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-30页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌分泌蛋白的提取 | 第26-27页 |
| ·胞外heme绑定蛋白的鉴定 | 第27页 |
| ·Heme琼脂糖亲和层析 | 第27-28页 |
| ·野生型hemophore分泌的优化 | 第28-29页 |
| ·野生型hemophore稳定性的检测 | 第29-30页 |
| 4 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 鸭疫里默氏杆菌潜在hemophore的生物信息学分析 | 第32-44页 |
| 1 试验材料 | 第32-33页 |
| ·主要生物信息学分析软件及在线分析工具 | 第32-33页 |
| 2 试验方法 | 第33-34页 |
| ·潜在hemophore基因的查找 | 第33页 |
| ·BLASTN分析 | 第33页 |
| ·蛋白质疏水性分析 | 第33页 |
| ·蛋白质抗原性及表面性分析 | 第33页 |
| ·蛋白质信号肽预测 | 第33-34页 |
| ·蛋白质亚细胞定位 | 第34页 |
| ·蛋白质结构预测 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-43页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌中的潜在hemophore基因 | 第34-36页 |
| ·鸭疫里默氏杆菌潜在hemophore基因家族 | 第36-38页 |
| ·蛋白质疏水性分析 | 第38-39页 |
| ·蛋白质抗原性及表面抗原分析 | 第39-40页 |
| ·蛋白质信号肽预测 | 第40页 |
| ·蛋白质亚细胞定位 | 第40-41页 |
| ·蛋白质结构预测 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 第四章 潜在hemophore基因的克隆、表达、蛋白纯化及其功能验证 | 第44-63页 |
| 1 试验材料 | 第44-46页 |
| ·菌株 | 第44页 |
| ·质粒 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·试剂配制 | 第44-46页 |
| ·细菌培养相关试剂配制 | 第44-45页 |
| ·核酸电泳相关试剂配制 | 第45页 |
| ·蛋白电泳相关试剂配制 | 第45页 |
| ·Western blot相关试剂配制 | 第45页 |
| ·蛋白纯化相关试剂配制 | 第45页 |
| ·其它相关试剂配制 | 第45-46页 |
| ·主要仪器设备 | 第46页 |
| 2 试验方法 | 第46-53页 |
| ·引物设计与合成 | 第46-47页 |
| ·潜在hemophore的PCR扩增 | 第47页 |
| ·PCR扩增产物的回收 | 第47-48页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第48-51页 |
| ·载体质粒的提取 | 第48页 |
| ·基因片段及质粒的酶切和回收 | 第48-49页 |
| ·连接 | 第49页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第49页 |
| ·连接产物的转化 | 第49-50页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第50-51页 |
| ·阳性质粒的提取及测序 | 第51页 |
| ·表达载体的构建及表达 | 第51-52页 |
| ·重组质粒转入表达菌 | 第51页 |
| ·表达菌阳性克隆的PCR鉴定 | 第51页 |
| ·诱导表达 | 第51-52页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第52页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第52-53页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第52页 |
| ·蛋白纯化 | 第52-53页 |
| ·潜在hemophore的功能验证 | 第53页 |
| 3 结果与分析 | 第53-60页 |
| ·潜在hemophore基因扩增 | 第53-54页 |
| ·PCR产物回收 | 第54页 |
| ·质粒提取 | 第54-55页 |
| ·酶切及连接 | 第55页 |
| ·转化 | 第55-57页 |
| ·PCR鉴定阳性克隆 | 第57页 |
| ·测序鉴定结果 | 第57页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第57-59页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| ·潜在hemophore的功能验证 | 第60页 |
| 4 讨论 | 第60-63页 |
| 第五章 hemophore作为抗菌靶点的探索 | 第63-68页 |
| 1 试验材料 | 第63页 |
| ·菌株 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·试剂配制 | 第63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| 2 试验方法 | 第63-64页 |
| ·SDNS最小抑菌浓度的测定 | 第64页 |
| ·抑菌生长曲线测定 | 第64页 |
| 3 结果与分析 | 第64-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 第三部分 致谢 | 第73-74页 |
| 附录 | 第74-75页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第75页 |
