组氨酸标签木聚糖酶的构建表达和酶特性鉴定
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-21页 |
| ·纤维素和半纤维素 | 第10-11页 |
| ·自然界中的纤维素和半纤维素 | 第10页 |
| ·工业生产中的纤维素和半纤维素 | 第10-11页 |
| ·糖苷水解酶研究综述 | 第11-12页 |
| ·糖苷水解酶家族 | 第11页 |
| ·半纤维素酶简介 | 第11-12页 |
| ·木聚糖酶研究进展 | 第12-16页 |
| ·木聚糖的水解 | 第12页 |
| ·极端木聚糖酶 | 第12-13页 |
| ·木聚糖酶的结构 | 第13-14页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第14-16页 |
| ·蛋白质稳定性研究进展 | 第16-19页 |
| ·蛋白质工程概述 | 第16页 |
| ·蛋白质结构与其稳定性 | 第16-17页 |
| ·蛋白质结构预测 | 第17-18页 |
| ·蛋白质纯化策略 | 第18页 |
| ·组氨酸标签纯化策略研究进展 | 第18-19页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第19页 |
| ·研究意义 | 第19-21页 |
| ·课题研究意义 | 第19-20页 |
| ·实验内容 | 第20-21页 |
| 第2章 组氨酸标签载体的构建及表达 | 第21-30页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·菌种和质粒 | 第21页 |
| ·引物合成及测序 | 第21页 |
| ·试剂盒、工具酶和试剂 | 第21页 |
| ·仪器 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21-22页 |
| ·常用溶液 | 第22页 |
| ·组氨酸标签木聚糖酶载体的构建 | 第22-27页 |
| ·组氨酸标签木聚糖酶基因表达载体的设计 | 第22-24页 |
| ·组氨酸木聚糖酶表达载体的构建 | 第24-26页 |
| ·组氨酸木聚糖酶表达菌株的构建 | 第26-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-29页 |
| ·载体构建凝胶检测结果 | 第27-28页 |
| ·dsb-his测序结果分析 | 第28-29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 第3章 组氨酸标签木聚糖酶的纯化 | 第30-39页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·仪器 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·工具酶和试剂 | 第30页 |
| ·常用溶液 | 第30-31页 |
| ·发酵重组木聚糖酶 | 第31-32页 |
| ·培养菌液 | 第31-32页 |
| ·诱导产酶 | 第32页 |
| ·重组木聚糖酶液的收集和粗提纯 | 第32页 |
| ·膜包浓缩 | 第32页 |
| ·硫酸铵沉淀 | 第32页 |
| ·Ni柱纯化重组木聚糖酶 | 第32-33页 |
| ·重生Ni柱 | 第32-33页 |
| ·Ni柱纯化重组木聚糖酶 | 第33页 |
| ·Ni柱的在位清洗 | 第33页 |
| ·超滤管浓缩纯化酶液 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE检验纯化重组木聚糖酶 | 第33-35页 |
| ·制备蛋白样品 | 第33-34页 |
| ·制胶 | 第34-35页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第35页 |
| ·结果与分析 | 第35-37页 |
| ·Ni柱纯化蛋白检测结果 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE检测纯化蛋白 | 第36-37页 |
| ·小结 | 第37-39页 |
| 第4章 组氨酸标签木聚糖酶的酶特性测定 | 第39-46页 |
| ·实验材料 | 第39-40页 |
| ·仪器 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·常用溶液 | 第39-40页 |
| ·酶的表达 | 第40页 |
| ·酶特性测定 | 第40-41页 |
| ·重组木聚糖酶DSB-His最适温度的测定 | 第40页 |
| ·重组木聚糖酶DSB-His最适pH的测定 | 第40页 |
| ·重组木聚糖酶DSB-His热稳定性的测定 | 第40页 |
| ·重组木聚糖酶DSB-His pH稳定性的测定 | 第40-41页 |
| ·结果分析 | 第41-44页 |
| ·重组酶表达结果 | 第41页 |
| ·重组酶的酶特性测定 | 第41-44页 |
| ·小结 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第53-54页 |
| 附录B 硫酸铵饱和度常用表 | 第54-55页 |
