| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 前言 | 第11-20页 |
| 1 犬瘟热的研究进展 | 第11-16页 |
| ·犬瘟热的发现与流行病学特点 | 第11-12页 |
| ·病原学 | 第12-14页 |
| ·犬瘟热病毒的分类地位 | 第12页 |
| ·犬瘟热病毒的形态和理化特征 | 第12页 |
| ·犬瘟热病毒的培养特性 | 第12-13页 |
| ·犬瘟热病毒的分子生物学特征 | 第13-14页 |
| ·致病机理 | 第14-15页 |
| ·临临床症状和病理变化 | 第15页 |
| ·免疫防控研究 | 第15-16页 |
| 2 犬瘟热病毒检测方法的研究进展 | 第16-19页 |
| ·病毒的分离 | 第16页 |
| ·动物回归试验 | 第16页 |
| ·包涵体检查 | 第16-17页 |
| ·电镜检查 | 第17页 |
| ·免疫学检测 | 第17-18页 |
| ·血清中和试验 | 第17页 |
| ·免疫组化技术 | 第17-18页 |
| ·免疫荧光技术 | 第18页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第18页 |
| ·胶体金免疫层析检测 | 第18页 |
| ·分子生物学检测 | 第18-19页 |
| ·核酸杂交技术 | 第18-19页 |
| ·RT-PCR技术 | 第19页 |
| ·环介导等温扩增 | 第19页 |
| 3 研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 材料与方法 | 第20-36页 |
| 1 材料 | 第20-24页 |
| ·病料 | 第20页 |
| ·试验动物 | 第20页 |
| ·载体 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·试验所用溶液及其配制 | 第21-23页 |
| ·分子克隆所需溶液的配制 | 第21页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所需溶液配制 | 第21页 |
| ·SDS-PAGE电泳所需溶液配制 | 第21-22页 |
| ·蛋白纯化所需溶液配制 | 第22-23页 |
| ·Western-blot及ELISA所需溶液配制 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-36页 |
| ·引物的设计与合成 | 第24页 |
| ·犬瘟热病毒全基因组RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·犬瘟热病毒H基因的扩增 | 第25页 |
| ·目的基因的纯化回收 | 第25-26页 |
| ·目的基因的克隆与鉴定 | 第26-29页 |
| ·CDV-H基因与pMD-18T simple vector连接 | 第26-27页 |
| ·重组克隆的转化 | 第27页 |
| ·重组克隆质粒的提取 | 第27-28页 |
| ·重组克隆质粒的PCR鉴定 | 第28页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·序列测定 | 第29页 |
| ·重组表达质粒的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| ·目的基因和pGEX-4T-1表达载体的酶切与回收 | 第29页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第29-30页 |
| ·连接产物的转化及质粒的提取 | 第30页 |
| ·重组表达质粒的PCR鉴定和酶切鉴定 | 第30页 |
| ·表达质粒的序列测定 | 第30页 |
| ·重组表达蛋白的诱导表达 | 第30-33页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白可溶性分析 | 第31页 |
| ·重组表达蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| ·重组表达蛋白的Western-blot分析 | 第32页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第32-33页 |
| ·多克隆抗体效价的检测 | 第33页 |
| ·重组蛋白间接ELISA方法的建立 | 第33-36页 |
| ·纯化抗原最佳包被浓度的筛选与血清最佳稀释度的筛选 | 第33页 |
| ·纯化抗原最佳包被条件的筛选 | 第33-34页 |
| ·最适封闭液的筛选和最佳封闭时间的筛选 | 第34页 |
| ·血清最佳作用时间的筛选 | 第34页 |
| ·酶标二抗最佳作用时间和最佳稀释度的筛选 | 第34页 |
| ·底物最适显色时间的筛选 | 第34页 |
| ·阳性和阴性临界值的确定 | 第34-35页 |
| ·特异性试验 | 第35页 |
| ·重复性试验 | 第35页 |
| ·间接ELISA方法与免疫胶体金方法的比较试验 | 第35页 |
| ·临床样本检测 | 第35-36页 |
| 结果 | 第36-52页 |
| 1 犬瘟热病毒H基因的RT-PCR扩增 | 第36页 |
| 2 pMD18T-CDV-H重组克隆质粒的鉴定 | 第36-38页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 3 重组质粒的序列测定及进化分析 | 第38页 |
| 4 重组质粒的PCR鉴定 | 第38-40页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 5 重组质粒的诱导表达 | 第40页 |
| 6 重组表达蛋白的可溶性分析 | 第40-41页 |
| 7 重组表达蛋白的纯化 | 第41-42页 |
| 8 重组表达蛋白的Western-blot分析 | 第42页 |
| 9 多克隆抗体效价的测定 | 第42页 |
| 10 间接ELISA检测方法的建立 | 第42-52页 |
| ·纯化抗原最佳包被浓度的筛选与血清最佳稀释度的筛选 | 第42-43页 |
| ·纯化抗原最佳包被条件的筛选 | 第43-44页 |
| ·最适封闭液的筛选和最佳封闭时间的筛选 | 第44-45页 |
| ·血清最佳作用时间的筛选 | 第45-46页 |
| ·酶标二抗最佳作用时间和最佳稀释度的筛选 | 第46-47页 |
| ·底物最适显色时间的筛选 | 第47-48页 |
| ·阳性和阴性临界值的确定 | 第48页 |
| ·特异性试验结果 | 第48-49页 |
| ·重复性试验结果 | 第49-50页 |
| ·间接ELISA方法与免疫胶体金方法的比较试验结果 | 第50-51页 |
| ·临床样本检测结果 | 第51-52页 |
| 讨论 | 第52-56页 |
| 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62页 |
