| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| ·基因靶向修饰 | 第12-16页 |
| ·CRISPR-Cas9核酸内切酶 | 第13-15页 |
| ·DNA双链断裂的修复机制 | 第15-16页 |
| ·提高基因打靶效率的研究进展 | 第16-18页 |
| ·提高同源重组修复效率的研究 | 第16-17页 |
| ·HR供体的形式和长度 | 第17-18页 |
| ·Gal4蛋白的结构与功能 | 第18页 |
| ·Gal4蛋白的结构 | 第18页 |
| ·Gal4蛋白的结合序列 | 第18页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 第二章 HEK-293T报告细胞系的构建 | 第20-30页 |
| ·试验材料 | 第20页 |
| ·载体、菌株及细胞 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·试验方法 | 第20-24页 |
| ·整合报告载体的构建 | 第20-22页 |
| ·整合型报告细胞系的构建 | 第22-24页 |
| ·试验结果与分析 | 第24-28页 |
| ·报告载体构建结果 | 第24-25页 |
| ·嘌呤霉素筛选结果 | 第25-26页 |
| ·细胞基因组DNA的提取与PCR鉴定 | 第26-28页 |
| ·讨论 | 第28页 |
| ·小结 | 第28-30页 |
| 第三章 Gal4BD-Cas9系统的构建及介导的修复效率研究 | 第30-43页 |
| ·试验材料 | 第30页 |
| ·试验方法 | 第30-36页 |
| ·Gal4BD-Cas9融合表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·PCR扩增获得同源重组供体 | 第32-34页 |
| ·HEK-293T报告细胞系的培养及转染 | 第34-35页 |
| ·Gal4BD-Cas9系统介导的同源重组修复T-A克隆检测 | 第35-36页 |
| ·试验结果 | 第36-40页 |
| ·Gal4BD-Cas9融合表达载体构建结果 | 第36-37页 |
| ·HEK-293T报告细胞系基因组靶向修饰结果 | 第37-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-43页 |
| 第四章 结论与创新点 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 附录 | 第48-51页 |
| 缩略词 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |