植物乳杆菌谷氨酸脱羧酶的原核表达及其酶学性质研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| ·γ-氨基丁酸（GABA）概述 | 第12-16页 |
| ·GABA及其结构特性 | 第12页 |
| ·GABA的生理功能 | 第12-14页 |
| ·GABA的应用 | 第14页 |
| ·GABA的制备方法 | 第14-15页 |
| ·GABA测定方法 | 第15-16页 |
| ·谷氨酸脱羧酶（GAD） | 第16-19页 |
| ·谷氨酸脱羧酶概述 | 第16-17页 |
| ·动物GAD | 第17页 |
| ·植物GAD | 第17页 |
| ·微生物GAD | 第17-18页 |
| ·微生物GAD在代谢途径中的作用 | 第18页 |
| ·GAD分子生物学研究 | 第18-19页 |
| ·本研究目的意义及研究内容 | 第19-21页 |
| ·本研究目的及主要内容 | 第19-20页 |
| ·创新点 | 第20-21页 |
| 第二章 gadB基因的克隆及重组表达工程菌的构建 | 第21-31页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·菌种及载体 | 第21页 |
| ·培养基及主要试剂 | 第21-22页 |
| ·引物合成及测序 | 第22页 |
| ·主要酶制剂和试剂盒 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-26页 |
| ·E.coli BL21感受态细胞的制备及转化 | 第23页 |
| ·gadB基因的克隆 | 第23-26页 |
| ·重组表达工程菌的构建 | 第26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-30页 |
| ·目的基因PCR扩增 | 第26-27页 |
| ·TA克隆结果的验证 | 第27-28页 |
| ·目的基因连接至表达载体 | 第28-29页 |
| ·重组表达质粒的验证 | 第29-30页 |
| ·本章小结 | 第30-31页 |
| 第三章 重组GAD序列及其结构分析 | 第31-40页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·主要数据库及软件 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-33页 |
| ·GAD序列及结构域分析 | 第32页 |
| ·GAD的基本信息分析 | 第32页 |
| ·GAD二级结构预测 | 第32页 |
| ·GAD三级结构预测 | 第32页 |
| ·多重序列比对 | 第32-33页 |
| ·系统进化树的构建 | 第33页 |
| ·结果与讨论 | 第33-38页 |
| ·GAD序列和结构域分析 | 第33-34页 |
| ·重组GAD氨基酸组成及其理化性质 | 第34-35页 |
| ·疏水性结构分析 | 第35-36页 |
| ·二级结构分析 | 第36页 |
| ·三级结构预测 | 第36-37页 |
| ·多重序列比对 | 第37-38页 |
| ·系统进化树的构建 | 第38页 |
| ·本章小结 | 第38-40页 |
| 第四章 重组GAD表达纯化及其活力分析 | 第40-54页 |
| ·实验材料 | 第40-43页 |
| ·菌种 | 第40页 |
| ·主要试剂及其配制方法 | 第40-42页 |
| ·主要药品和试剂 | 第42-43页 |
| ·主要仪器设备 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第43页 |
| ·重组蛋白的表达条件优化 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白可溶性验证 | 第44页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第44页 |
| ·纯化目的蛋白GAD浓度的测定 | 第44-45页 |
| ·重组GAD活力测定 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-53页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第46-47页 |
| ·表达条件优化 | 第47-49页 |
| ·融合蛋白的可溶性分析 | 第49页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第49-50页 |
| ·重组GAD活力分析 | 第50-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 第五章 重组GAD酶学性质研究 | 第54-63页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·菌种与培养基 | 第54页 |
| ·主要药品及仪器 | 第54-55页 |
| ·主要试剂的配制方法 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-57页 |
| ·最适pH的确定及pH稳定性 | 第55页 |
| ·最适反应温度的确定及温度稳定性 | 第55-56页 |
| ·辅酶PLP浓度对酶活力的影响 | 第56页 |
| ·金属离子及EDTA对酶活的影响 | 第56页 |
| ·表面活性剂对酶活力的影响 | 第56页 |
| ·有机溶剂对酶活力的影响 | 第56页 |
| ·米氏常数的确定 | 第56-57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-62页 |
| ·最适pH的确定及pH稳定性 | 第57页 |
| ·最适反应温度及温度稳定性 | 第57-58页 |
| ·辅酶PLP浓度对酶活力的影响 | 第58-59页 |
| ·不同金属离子及EDTA对酶活的影响 | 第59-60页 |
| ·表面活性剂对酶活力的影响 | 第60页 |
| ·有机溶剂对酶活力的影响 | 第60-61页 |
| ·米氏常数 | 第61-62页 |
| ·本章小结 | 第62-63页 |
| 第六章 结论与展望 | 第63-65页 |
| ·结论 | 第63页 |
| ·展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
